Geração de células CAR-T humanas capazes de eliminar macrófagos associados a tumores.

• Processo: 24/04661-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Vanderson Geraldo Rocha
• Beneficiário: Vinicius Alex Cano Pereira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/08135-2 - CTC - Centro de Terapia Celular, AP.CEPID
• Assunto(s): Neoplasias Imunoterapia Macrófagos Terapia baseada em transplante de células e tecidos Hematologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Car-T | Immunotherapy | imunoterapia | Macrophages | terapia celular | Hematologia

Resumo

A imunoterapia revolucionou o tratamento para câncer nos últimos anos, com destaque para a terapia celular adotiva utilizando células CAR-T (do inglês, chimeric antigen receptor) para tumores hematológicos. No caso de tumores sólidos, há vários estudos pré-clínicos e clínicos em andamento que mostram um cenário desafiador por conta da falta de expansão e persistência das células CAR-T in vivo, dificuldade de migração em tumores sólidos e o microambiente tumoral imunossupressor. Das células que compõem o microambiente tumoral, os macrófagos estão presentes em grande quantidade em diversos tumores sólidos, sendo um biomarcador de mau prognóstico devido a grande capacidade de imunossupressão da atividade citotóxica de linfócitos T. Dessa forma, visando uma terapia ampla para vários tumores sólidos, propomos o desenvolvimento de dois receptores independentes do tipo CAR de segunda geração que elimine os macrófagos infiltrantes do tumor (TAM) através das moléculas alvo CD163 e CD14. Para inserção do CAR nos linfócitos T de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de doadores saudáveis, utilizaremos eletroporação com 2 plasmídeos, sendo o primeiro um vetor PiggyBac contendo o CAR com um enhancer CMV e o promotor de beta-actina de galinha. O segundo vetor contém a sequência da transposase e faz a inserção no DNA da célula alvo. Além da confirmação da expressão do CAR por citometria de fluxo, faremos ensaios funcionais in vitro como citotoxicidade das células CAR-T frente a macrófagos. Os macrófagos serão obtidos da diferenciação de monócitos in vitro com a utilização de citocinas conforme protocolo já estabelecido no laboratório. Ao final desse projeto, pretendemos obter dois novos CARs com atividade anti-macrófago para futuros testes in vivo com modelos para diferentes tipos de tumores sólidos.