Lupus La: caracterização e análise funcional da proteína em Leishmania braziliensis

• Processo: 24/20016-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Angela Kaysel Cruz
• Beneficiário: Isabela D'Auria Antuniassi
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/03015-0 - Da epigenética, variabilidade genômica e regulação da expressão gênica em Leishmania, AP.TEM
• Assunto(s): Leishmania
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: leishmania | Lupus la | ncRNA | proteína ligante de rna | Genética Molecular de Leishmania

Resumo

Protozoários do gênero Leishmania causam um conjunto de doenças negligenciadas chamadas leishmanioses, sendo o estudo destes parasitos essencial para potenciais alvos terapêuticos. Durante seu ciclo de vida, este organismo passa por ambientes distintos como o intestino do vetor flebotomíneo e as células do sistema imunológico do hospedeiro mamífero. Desse modo, aspectos imprescindíveis para sua sobrevivência incluem a organização genética e a regulação da expressão gênica, que está intimamente relacionada com modificações pós-transcricionais. Nesse sentido, as proteínas de ligação ao RNA (RBPs) desempenham um papel importante determinando o destino de RNAs mensageiros (mRNAs) por meio do reconhecimento de sequências específicas. Em estudos recentes do laboratório, a proteína Lupus La foi identificada como uma RBP ligante de RNA longo não codificante (lncRNA), expresso diferencialmente no ciclo de vida do protozoário. Esta proteína mostrou-se interessante pois, além disso, foi encontrada associada ao lncRNA Grumpy de T. brucei, envolvido na biogênese ribossômica, bem como na diferenciação morfológica do tripanossomatídeo. Com isso, este projeto tem como objetivo principal investigar e caracterizar a Lupus La em Leishmania braziliensis. Para isso, a técnica CRISPR-Cas9 será utilizada para etiquetagem da proteína e nocaute do gene de Lupus La. Assim, será possível verificar sua localização subcelular, por meio da microscopia de imunofluorescência, além de avaliar alterações fenotípicas e abundância da proteína nas diferentes fases do ciclo de vida do parasito. Por fim, serão analisados resultados preliminares de um ensaio de pulldown, com o intuito de visualizar as interações de Lupus La com outras proteínas e com RNAs não codificantes (ncRNAs).