Localização da proteína P61 dos cilevírus por métodos imunoquímicos

• Processo: 25/03469-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Juliana de Freitas Astúa
• Beneficiário: Thaís Teodoro de Oliveira Santos
• Instituição Sede: Instituto Biológico (IB). Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios (APTA). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/25078-9 - Genômica e transcriptômica das relações vírus-vetor-hospedeira nos patossistemas dos vírus transmitidos por Brevipalpus; sistemática e evolução de Brevipalpus e seus endosimbiontes; novas estratégias no manejo da Leprose do citros no Estado de São Paulo, AP.TEM
• Assunto(s): Glicoproteínas Microscopia eletrônica Vírus de plantas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: citrus leprosis virus c | glicoproteina | Microscopia Eletrônica | proteína estrutural | vírus transmitidos por ácaros Brevipalpus | Vtb | Virologia vegetal

Resumo

O objetivo deste projeto é detectar a presença da possível glicoproteína P61 como componente estrutural das partículas maduras dos cilevírus. A composição das partículas de cilevirus é relativamente desconhecida. Avaliações in silico indicam que a P61, e também a proteína P24, possuem domínios transmembranas que permitem as suas inserções nas membranas das células infectadas e nos envelopes dos virions. No entanto, só existe comprovação experimental da inserção da P24 nas membranas celulares. Neste projeto propõe-se identificar a presença da proteína P61 nas partículas virais em tecidos vegetais infectados e ácaros Brevipalpus yothersi virulíferos através de técnicas imuno-histoquímicas e microscopia eletrônica de transmissão. A expressão da proteína nativa P61 em células de insetos Sf9 mediante vetores baseados em baculovírus resulta na morte prematura das células. Por conseguinte, a quantidade de proteína P61 recombinante recuperada da biomassa é insuficiente para o desenvolvimento de um esquema de imunização em coelhos. O processo de morte celular observado nas células de inseto transfectadas é recorrentemente observado durante a expressão ectópica da proteína nos tecidos da planta Nicotiana benthamiana. Para contornar a expressão da proteína, uma alternativa é a síntese de peptídeos que serão usados em esquemas de imunização para a obtenção de anticorpos policlonais. Análises in silico mediante técnicas bioinformáticas, ex. a modelagem 3D das proteínas, perfis imunorreativos, permitiram estimar os peptídeos correspondentes a regiões expostas e imunogênicas da P61 das estirpes do vírus da leprose dos citros C (Cilevirus leprosis) e as proteínas homólogas de outras espécies de cilevirus. Os anticorpos gerados serão incorporados em técnicas de imunolocalização usando anticorpos ante espécies conjugados com nanopartículas de ouro coloidal. (AU)