Avaliação da glicosilação,solubilidade, estabilidade e resposta imune de uma serinoprotease recombinante de Crotalus durissus collilineatus modificada por PEGlação

• Processo: 25/05917-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Toxicologia
• Pesquisador responsável: Eliane Candiani Arantes Braga
• Beneficiário: Isadora Lino Mendes
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11936-3 - Centro de Ciência Translacional e Desenvolvimento de Biofármacos, AP.CCD
• Assunto(s): Expressão heteróloga Glicosilação Serpentes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: expressão heteróloga | glicosilação | Heterogênea | PEGlaçao | serpente | Toxinologia

Resumo

A rCollineina-1 é uma serinoprotease recombinante de Crotalus durissus collilineatus, capaz de interferir nos mecanismos que controlam a hemostasia, sendo considerada uma alternativa promissora para o tratamento de distúrbios vasculares e trombóticos. Entretanto, seu padrão heterogêneo de glicosilação pode impactar a imunogenicidade, propriedades estruturais e funcionais. Nesse contexto, a PEGlação surge como uma alternativa promissora para viabilizar seu uso clínico. Com base nisso, este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da glicosilação e PEGlação na atividade, solubilidade, estabilidade e imunogenicidade da rCollineina-1. A expressão será realizada em Komagataella phaffii e a purificação por cromatografia de afinidade a íons metálicos. O polímero mPEG-maleimide 5 kDa será empregado na PEGlação, cuja eficiência será avaliada por cromatografia líquida em fase reversa (C4). A interação rCollineina-1-PEG será simulada por modelagem molecular com AutoDock Vina. A atividade proteolítica será medida sobre fibrinogênio e a cinética, no substrato cromogênico S-2302. Solubilidade e estabilidade serão avaliadas pelo método do frasco agitado e sob estresse ácido, básico e oxidativo. A caracterização dos glicanos será feita por enriquecimento de glicopeptídeos seguido de espectrometria de massas. A funcionalidade in vivo será investigada por ensaios antitrombóticos e coagulograma, e a imunogenicidade por ELISA indireto, quantificando anticorpos específicos em soro de camundongos. Os resultados poderão identificar fatores-chave na caracterização da rCollineina-1 e gerar dados inéditos sobre a aplicabilidade da PEGlação em SVSPs recombinantes glicosiladas. (AU)