Caracterização da ativação da proteína gq/11 por adrenoceptores alfa-1 humanos em células hek 293

• Processo: 04/11825-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: André Sampaio Pupo
• Beneficiário: Aderbal Ruy Teodoro da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas de ligação ao GTP Noradrenalina Imunoprecipitação Propriedades bioquímicas Propriedades funcionais Análise funcional
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adrenoceptores Alfa-1 | Noradrenalina | Proteina G

Resumo

Importantes ações da noradrenalina e adrenalina resultam da ativação de receptores adrenérgicos alfa-1 (a1-ARs). Os a1- ARs compreendem uma família de receptores composta por três diferentes subtipos (a1A-, a1B- e a1D-ARs), sendo todos igualmente ativados pela noradrenalina e adrenalina. Muitas vezes, esses receptores encontram-se co-expressados em um mesmo tecido, dificultando o estudo de suas propriedades farmacológicas e bioquímicas individuais. Assim, o objetivo da presente monografia é gerar clones de células que expressam cada um dos subtipos de a1-ARs e padronizar um ensaio funcional da ligação de [35S]-GTPgamaS em resposta à noradrenalina. Esses clones serão úteis no estudo das propriedades bioquímicas e farmacológicas desses receptores. Para tanto, células HEK 293 serão transfectadas com plasmídeos de expressão contendo os cDNAs que codificam cada um dos subtipos de a1-ARs humanos e selecionadas com geneticina. A expressão dos subtipos de a1-ARs nessas células será caracterizada por ensaios da ligação do ligante seletivo de a1-ARs, o [3H]prazosin, e pela inibição dessa ligação com drogas que interagem seletivamente com cada um desses subtipos, enquanto que as propriedades funcionais desses receptores serão identificadas por ensaios de ligação do [35S]GTPgamaS em resposta à noradrenalina seguida de imunoprecipitação da subunidade alfaq/11 da proteína G com anticorpos policlonais e contas de agarose ligadas à proteína A/G. (AU)