Determinação do efeito da Toxina Distensora Citoletal sobre a indução de artrite em modelo animal.

• Processo: 10/12559-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Ellen Sayuri Ando Suguimoto
• Beneficiário: Glaucia Morais Santos
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Artrite reumatoide Aggregatibacter actinomycetemcomitans
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aggregatibacter actinomycetemcomitans | artrite reumatóide | toxina distensora citoletal | Oral

Resumo

Foi sugerido que a toxina distensora citoletal (CDT), produzida por A. actinomycetemcomitans e outros patógenos Gram negativos de mucosa, teria atividade imunomodulatória, favorecendo a perpetuação da infecção pela bactéria produtora. Esta atividade seria devido a atividade tóxica sobre linfócitos T à CDT (SHENKER; DEMUTH; ZEKAVAT, 2006), e pela inibição da produção de NO por macrófagos ativados (FERNANDES; MAYER; ANDO et al., 2008) (KAWAMOTO; ANDO; LONGO et al., 2009). Por outro lado, a inibição da produção de NO poderia levar a maior atividade osteoclástica (FUKADA; SILVA; SACONATO et al., 2008). CDT é pouco imunogênica, não induzindo a resposta sérica em indivíduos infectados por bactéria produtora de CDT como A. actinomycetemcomitans e apresentando altos títulos de anticorpos contra a bactéria total (ANDO; DE-GENNARO; FAVERI et al., 2010) e proteínas de membrana externa (Omps) da bactéria (Brunheira et al., 2007). Além disso, a CDT foi capaz de inibir a produção de NO por macrófagos murínicos (KAWAMOTO; ANDO; LONGO et al., 2009). A artrite reumatóide é uma doença sistêmica crônica autoimune caracterizada por um processo inflamatório crônico que atinge a membrana sinovial das articulações. Estudos em modelo animal murino sugerem que NO induz inflamação nas articulações e destruição tecidual, e a severidade da artrite pode ser reduzida pela administração de inibidores de NOS (MCCARTNEY-FRANCIS; ALLEN; MIZEL et al., 1993). Assim, visando determinar o efeito da CDT sobre um processo inflamatório já estabelecido e sobre a reabsorção óssea, o presente estudo se propõe a avaliar o efeito da inoculação intra-articular de CDT em modelo animal de artrite experimental.Em estudo piloto realizado em nosso laboratório, AaCDT purificada foi inoculada no volume de 10µl na região intra-articular do joelho de camundongos C57/BL6 nas concentrações de 15, 30, 60 µg/ml em duplicata e após 7 dias não foi observado nenhum efeito tóxico, formação de edema, aumento de peso devido a CDT, destruição tecidual local e alteração do aspecto macroscópico do baço (Santos, G.M. dados não publicados).Artrite experimental será induzida em 48 camundongos da linhagem LIII, pela inoculação intraperitoneal de Pristane (grupo T). Animais controle (n=24) receberão injeção de PBS (grupo C). Os animais C e T serão subdivididos aleatoreamente em 4 grupos de 6 animais cada. Os animais de ambos os grupos serão sacrificados após 60 (T1/T3 e C1/C3) e 90 dias (T2/T4 e C2/C4). Seis animais de cada grupo receberão injeções de toxina distensora citoletal recombinante de A. actinomycetemcomitans após 30 e 50 dias (Grupo T1 e C1), 30, 50 e 70 dias (grupo T2 e C2). Animais dos grupos T3, C3, T4 e C4 receberão injeção intra-articular de PBS e serão sacrificados após 60 dias (grupos T3 e C3) e 90 dias (grupos T4 e C4). A severidade da artrite será determinada pela mensuração do edema da pata. Os níveis de TNF-a, IFN-³, IL-1-², IL-17, IL-10, IL-4, sRANKL (RANKL solúvel) e de NO serão determinados nos líquido sinovial e nos tecidos articulares por ELISA. Além disso, serão realizadas análises da articulação por técnicas histopatológicas e por técnica de tomografia por coerência óptica.