Identificação e caracterização funcional da sumoilação da proteína humana reguladora Ki-1/57

• Processo: 09/15216-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Ângela Saito
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Oncoproteínas Anticorpos monoclonais Sumoilação Transdução de sinais Transcrição genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: onco proteína | regulação da tradução | Sinalização | sinalização celular

Resumo

O antígeno protéico Ki-1/57 foi identificado por um anticorpo monoclonal, Ki-1, que detectou especificamente células malignas de Hodgkin e células Sternberg-Reed no linfoma de Hodgkin. Esta proteína é expressa em células de uma variedade de tipos de câncer, sendo também expressa em leucócitos do sangue humano ativados com mitógenos, mas não em células não ativadas. O antígeno Ki-1/57 mostrou-se fosforilado em resíduos de serina e treonina. Análises de microscopia eletrônica demonstraram que o antígeno Ki-1/57 está localizado no citoplasma, poros nucleares e no núcleo, associado ao nucléolo. Para entender melhor o contexto biológico desta proteína, realizamos análises com o sistema de duplo híbrido de levedura para identificar proteínas que interagem com Ki-1/57. Duas delas são a proteína adaptadora de quinase RACK-1 envolvida em mecanismos da tradução de sinal e a proteína p53 que está relacionada com o mecanismo de verificação de mutações na sequência de DNA das células. Em ensaios celulares vimos ainda que Ki-1/57 está associada a corpúsculos nucleares envolvidos no processamento de RNA e que sua sequência de aminoácidos apresenta motivos de sumoilação. Esta modificação de proteínas com a proteína SUMO (small ubiquitin like modifier) tem sido implicada na regulação da localização sub-celular da proteína e na repressão da expressão gênica. Além disso, a sumoilação ocorre com certa freqüência em proteínas nucleares, principalmente naquelas que se localizam nos corpúsculos nucleares. Neste projeto temos como principal objetivo o estudo funcional da sumoilação da proteína Ki-1/57. Para isso realizaremos mutagêneses sítio dirigido das Lisinas alvos de sumoilação na proteína Ki-1/57. Posteriormente as proteínas mutadas serão expressas em células humanas para estudos funcionais e de localização celular. Queremos estudar o efeito da sumoilação na localização celular e na ativação da transcrição gênica utilizando um sistema de gene repórter da luciferase.