Eletroforese em Microdispositivos com Detecção por Espectrometria de Massas e Análise de Glicoproteínas: Aplicação na Análise Glicoproteômica do Trypanosoma Cruzi usando Afinidade a Lectinas

• Processo: 08/05648-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Analítica
• Pesquisador responsável: Emanuel Carrilho
• Beneficiário: Evandro Piccin
• Instituição Sede: Instituto de Química de São Carlos (IQSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Espectrometria de massas Miniaturização Glicoproteínas Lectinas Instrumentação analítica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Eletroforese em Microdispositivos | Espectrometria de massas | glicoproteínas | Lectinas | Miniaturização | Trypanosoma cruzi | Instrumentação Analítica

Resumo

Esse projeto de pesquisa apresenta uma proposta para o desenvolvimento de instrumentação em eletroforese em microdispositivos com detecção por espectrometria de massas (ME-MS) para a análise de glicoproteínas. O acoplamento ME-MS será inicialmente avaliado usando duas interfaces electrospray (ESI) diferentes (sheath-flow e sheathless) na otimização das condições de análise para a separação e identificação de glicopeptídeos originados de glicoproteínas modelos, como a RNase B e IgA.O sistema ME-MS que apresentar os melhores resultados será selecionado para o estudo glicoproteômico da membrana celular do parasita Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. As glicoproteínas do T. cruzi serão separadas do lisado celular do parasita por meio de cromarografia de afinidade a lectinas (LAC) usando as lectinas concavalina e jacalina. Essas lectinas possuem seletividades específicas a tipos diferentes de cadeias polissacarídicas e, portanto, farão a seleção de tipos diferentes de glicoproteínas.As análises dos glicopeptídeos envolvendo a ME-MS sempre terão como base de comparação a eletroforese convencional acoplada à espectrometria de massas (CE-MS), que é uma técnica bem mais estabelecida para esse tipo de estudo. Os espectros de massas obtidos para os glicopeptídeos separados por ME e CE, bem como seus espectros de fragmentação (MS/MS), serão analisados e combinados com ferramentas de bioinformática para identificação de glicoproteínas presentes na membrana celular do T. cruzi.