Vias de sinalizacao no trypanosoma cruzi. estudo das fosfatidilinositol 3-quinases nas formas metaciclicas do parasita.

• Processo: 03/13478-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2004
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia
• Pesquisador responsável: José Franco da Silveira Filho
• Beneficiário: Ivan Teobaldo Neira Cortes
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 02/13705-8 - Bases moleculares da infecção pelo Trypanosoma cruzi: análise dos mecanismos envolvidos e comparação das duas linhagens filogenéticas distintas do parasita, AP.TEM
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Fosfatidilinositol 3-quinases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem Genetica | Fosfatidilinositol 3-Quinases | Tripomastigotas Metaciclicas | Trypanosoma Cruzi

Resumo

Quando o T. cruzi infecta a célula hospedeira ocorre uma dramática alteração na célula com ativação de cascatas de sinalização e movimentação de lisossomos no sítio de entrada do parasita. Entretanto existe pouca informação sobro o ativação de vias de transdução de sinal no parasita. As evidências indicam que a entrada das formas metaciclicas do T. cruzi na célula hospedeira requer ativação da proteína tirosina quinase (PTK) que resulta na fosforilação de um substrato de 175 kDa (p175) e no aumento da concentração do Ca2+ citosólico. Apesar de evidências indicando que a P13K está envolvida em numerosas vias de sinalização, existe pouca informação sobre a sua participação na invasão pelo T. cruzi. Assim traçamos como objetivos: a) Definir o papel da PI3K no processo de invasão das formas metacíclicas do T. cruzi; b) Determinar os níveis de fosforilação das proteínas do parasita expostos a inibidores de PI3K, após interação com componentes da célula hospedeira; c) Definir seqüências de nucleotídeos que codifiquem a PI3K de T. cruzi baseando-se em seqüências conhecidas de outras espécies. A partir delas, desenhar "primers" que permitam sintetizar cDNA por RT-PCR; d) Expressar a proteína recombinante PI3K em bactérias; e) Analisar a transcrição e expressão do gene PI3K por hibridização de ácidos nucléicos, "western blotting" e microscopia confocal. (AU)