Análise funcional da proteína SET na regulação da AKT em linhagem celular humana

• Processo: 09/05527-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Andréia Machado Leopoldino
• Beneficiário: Renata Nishida Goto
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/06334-4 - Estudo molecular e funcional da oncoproteína SET, AP.JP
• Assunto(s): Expressão de proteínas Proteína oncogênica v-akt Oncogenes Fosforilação Proliferação celular Neoplasias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Akt | câncer | Expressão de proteína | fosforilação | Set | Sinalização | sinalização molecular

Resumo

A proteína SET possui expressão alterada em tumores de cavidade oral o que sugere seu papel como oncogene nesta tumorigênese. A proposta de iniciação científica está vinculada ao Projeto de Jovem Pesquisador aprovado pela FAPESP (2006/06334-4). Sendo assim o objetivo deste trabalho de IC é a identificar qual região da proteína SET exerce atividade na regulação da fosforilação da proteína AKT. Para avaliar o papel da SET e mapear a região envolvida na atividade de AKT será realizada a expressão da proteína e das regiões da SET usando vetor de expressão em eucarioto e a linhagem celular HEK293T humana. Os DNAs recombinantes já foram obtidos no projeto de IC finalizado em dezembro de 2008 (2008/01509-6) e estão disponíveis para o estudo funcional. A análise de expressão da SET e das regiões específicas da SET será avaliada por immunoblotting usando anticorpo anti-SET e anti-V5, e a alteração de fosforilação da proteína AKT será avaliada por immunoblotting usando anticorpo anti-phospho-AKT e AKT total. Será realizada também a análise de proliferação celular usando ensaio de MTT e localização celular da proteína e das regiões específicas por imunocitoquímica. Esta proposta permitirá o treinamento do aluno de IC e auxiliará no desenvolvimento do projeto JP. Os resultados obtidos serão extremamente importantes para a proposta "Estudo molecular e funcional da oncoproteína SET" (2006/06334-4).