Bloqueio por fenilpropenos de canais para Na+ ativados por voltagem

• Processo: 10/07910-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
• Pesquisador responsável: Gerhard Malnic
• Beneficiário: Ricardo Tsuneo Yassaka
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 08/58287-5 - Estudo molecular e funcional de transportadores de ions em membranas, AP.TEM
• Assunto(s): Eletrofisiologia Técnicas de Patch-Clamp
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: canais iônicos para sódio dependentes de voltagem | expressão transiente em células HEK | fenilpropenos | patch clamp | Eletrofisiologia

Resumo

Fenilpropenos são moléculas de baixo peso molecular, geralmente hidrofóbicas, sintetizadas por plantas angiospermas. Recentemente nós e outros grupos demonstramos que o eugenol, um fenilpropeno, bloqueia rápida e reversivelmente canais para Na+ dependentes de voltagem para sua ativação. O bloqueio pode ser potencializado pelo aumento na freqüência de estimulação ou pela despolarização do potencial de manutenção, em experimentos de "voltage clamp". Outros fenilpropenos também bloqueiam estes canais para Na+ com o faz o eugenol. Entretanto há uma certa correlação entre a hidrofobicidade de algumas regiões na molécula e a potência do bloqueio por essas moléculas. A cadeia lateral hidrofóbica presente num fenilpropeno parece ser importante para o estabelecimento da ligação do fenilpropeno com a molécula protéica do canal, para bloqueá-lo. Como os dados mostrados acima foram colhidos em preparações com células nativas, e estas, por conter mais de uma isoforma de canais para Na+ dependentes de voltagem, é considerável que uma análise mais precisa das relações entre estrutura do fenilpropenos bloqueador e o próprio efeito ficará prejudicada. Mais ainda, os mecanismos de ação possivelmente proposto de posse dos resultados não serão completamente confiáveis devido a inclusive uma variação na expressão das isoformas. Assim, esse projeto visa analisar o efeito dos fenilpropenos em canais para Na+ expressos numa linhagem de células desprovida da expressão constitutiva destes canais. Para isso pretende-se utilizar-se cDNAs de pelo menos duas subunidades alfa de canais para Na+ (preferencialmente uma TTX-S e outra TTX-R) e células HEK293 como substrato celular para a expressão. Vários fenilopropenos foram escolhidos mediante pré-requisitos estabelecidos de acordo com grupamentos substituintes do anel aromático ubíquo. As moléculas escolhidas além do eugenol são acetil-eugenol, metil-eugenol, estragol, anetol, guaiacol, isoeugenol, zingerone e vanilina. Tentar-se-á estabelecer uma correlação estrutura-efeito para o bloqueio de uma determinada subunidade alfa de canal para Na+ por fenilpropenos. Nos experimentos será utilizada a técnica de "Patch Clamp" para o registros de correntes.