Efeito do silenciamento do gene MDM2 nas respostas de células humanas primárias a irradiação UVB

• Processo: 07/52949-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Tomás de Paula e Silva
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 03/13255-5 - Genes de reparo de DNA: análise funcional e evolução, AP.TEM
• Assunto(s): Xeroderma pigmentoso Síndrome de Cockayne Raios ultravioleta Interferência de RNA Fibroblastos Apoptose Transfecção
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Celulas Primarias | Mdm2 | P53 | Rnai | Ultravioleta

Resumo

O presente projeto destina-se inicialmente à caracterização das respostas à irradiação com luz ultravioleta (UVB) de fibroblastos humanos primários em cultura, provenientes de indivíduos normais e de portadores das síndromes Xeroderma Pigmentosum grupo C (XP-C) e Síndrome de Cockayne grupo B (CS-B), ambas resultantes de mutações em genes ligados ao reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (NER), a principal via de remoção dos danos causados por UV. As respostas serão medidas em termos de viabilidade e morte por apoptose das células, utilizando para isso testes de metabolismo e de conteúdo de DNA celular. As respostas de células em confluência (em aquiescência mitótica) e em sub-confluência serão comparadas. Em seguida será otimizado um protocolo para transfecção dessas células com siRNA, com o qual será silenciada a produção da proteína Mdm2 (envolvida na regulação da resposta apoptótica por sua interação com a proteína p53) para a verificação dos efeitos resultantes nas mesmas respostas à irradiação UVB. A comparação com as respostas obtidas em células não tratadas permitirá investigar as funções da Mdm2 na regulação da resposta a danos no DNA. A pesquisa proposta propicia, portanto, o desenvolvimento de protocolos experimentais de utilidade geral e uma melhor caracterização das funções da Mdm2 em importantes processos celulares. (AU)