Criação de glucoamilase termoestável de (Aspergillus awamori) pela técnica de PCR mutagênico

• Processo: 00/15112-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
• Pesquisador responsável: Roberto da Silva
• Beneficiário: Carla Michely Yamaguti Lemos
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Estabilidade térmica Glucana 1,4-alfa-glucosidase Mutação Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Glucoamilase | Mutacoes Aleatorias | Pcr Mutagenico | Termoestabilidade

Resumo

A glucoamilase é uma proteína altamente glicosilada que catalisa a liberação hidrolítica da D-glucose a partir da extremidade não redutora do amido e oligossacarídeos relacionados. A estabilidade da glucoamilase cai rapidamente em torno de 60ºC. Uma glucoamilase mais estável, que poderia ser usada a temperatura mais altas, é industrialmente desejável. Neste projeto, faremos mutagêneses aleatórias no gene da glucoamilase selvagem de Aspergillus awamori usando PCR mutagênico para gerar quimeras com mutações no gene selvagem. Clones com esta função melhorada terão seus DNA re-embaralhados (shuffling) e re-selecionados num total de 2-3 ciclos para desenvolver quimeras de colônias de levedura que irão produzir enzimas glucoamilases mutantes com a sua termo-estabilidade melhorada quando comparada com a selvagem. A termo-estabilidade das enzimas brutas serão avaliadas pelo teste de formação de halo em placas de amido e por cinética de inativação térmica. (AU)