Expressão em BCG recombinante de Sm14 de Schistosoma mansoni a partir do gene sintético: resposta imune contra helmintos

• Processo: 02/00716-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2002
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Luciana Cezar de Cerqueira Leite
• Beneficiário: Paula Bertoloto Varaldo
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Esquistossomose Schistosoma mansoni Resistência genética BCG recombinante Interferon gama Resposta imune Auxotrofia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Auxotrofia | Clonagem | Recombinacao Homologa | Schistosoma Mansoni | Sm 14

Resumo

A Esquistossomose é causada pelo helminto Schistosoma mansoni e a Sm14, tem sido considerada um bom candidato a antígeno vacinal. Inicialmente, Sm14 foi expresso em BCG sob o controle do promotor pBlaf*. Animais imunizados com rBCG-Sm14 apresentaram uma resposta celular mediante a produção de Interferon-gama. Como a foi observado uma expressão baixa de Sm14 em BCG, nós sintetizamos o gene Sm14 com os códons preferenciais para micobactéria a fim de elevar a expressão e modificar a resposta imune induzida. Para a continuidade deste projeto, nós propomos I) a investigação da expressão e indução da resposta imune conferida por Sm14 expressa por um gene sintético com os códons preferenciais para micobactéria; II) utilização de uma cepa de BCG com auxotrofia para leucina que não contenha o gene de resistência a antibiótico, para ser complementada com uma plasmídeo contendo o cassete de expressão de Sm14 e o gene de auxotrofia complementar (em desenvolvimento); e III) construção de um plasmídeo contendo um cassete de expressão de Sm14 flanqueado por sequências do gene leuD, o gene de resistência a kanamicina e o gene sacB, para realizar a inserção do cassete de expressão por recombinação homóloga, gerando um BCG recombinante auxotrófico sem gene de resistência a antibiótico. As vacinas de rBCG-Sm14 serão administradas em camundongos para verificação da indução de uma resposta imune contra Schistossoma mansoni. (AU)