Envolvimento do proteoglicano de heparam sulfato nos processos de secrecao e internalizacao de catepsina b.

• Processo: 01/01726-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ivarne Luis dos Santos Tersariol
• Beneficiário: Yvette May Coulson-Thomas
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 97/13133-4 - Estudo da atividade de proteinases e glicosidases capazes de degradar componentes da matriz extracelular, AP.JP
• Assunto(s): Catepsina B Endocitose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Catepsina B | Cho | Endocitose | Glicosaminoglicano

Resumo

A interação de cisteíno-proteinases lisosomais, especialmente catepsina B, com proteoglicanos é de grande interesse para entender a remodelação tecidual e progressão tumoral. A presença de catepsina B na membrana plasmática resulta em dissolução focal de proteínas da matriz extracelular e permite a invasão do tecido por células tumorais. O objetivo deste projeto é investigar a interação entre catepsina B e proteoglicanos de heparam sulfato de superfície celular, como também seu papel na secreção e internalização de catepsina B. Serão utilizadas células CHO-K1 e sua mutante CHO-745 deficiente na enzima xilosil transferase. Também células CLPS e sua mutante transfectada com o gene ras. A expressão de catepsina B em meio condicionado e extrato celular será determinado por spectrofluorometria. A identificação e quantificação de proteoglicanos e glicosaminoglicanos será feita por eletroforese em gel de agarose e posterior exposição a um filme sensível a radioatividade. Em ensaios de imunocitoquímica para visualização endógena de catepsina B, o anticorpo primário será o anticatepsina B humana e o anticorpo secundário será o anticorpo antilgG de coelho conjugado com Alexa Flúor 488. Em ensaios de imunocitoquímica para visualização exógena de catepsina B, será utilizada catepsina B conjugada com flúor. (AU)