Estudos estruturais com a importina-α do fungo Neurospora crassa e sequências de localização nuclear

Autor(es)

Natália Elisa Bernardes

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Botucatu. 2015-06-17.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências. Botucatu
• Data de defesa: 2014-07-24
• Orientador: Marcos Roberto de mattos Fontes; Agnes Alessandra Sekijima Takeda

Resumo

Um dos mecanismos de transporte de macromoléculas do citoplasma para o núcleo celular ocorre através da passagem da macromolécula pelo complexo poro nuclear (CPN), presente no envoltório nuclear, e depende de proteínas transportadoras denominadas Importinas. Neste processo, conhecido como via clássica de importação nuclear, a proteína Importina-α (Impα) reconhece sequências de localização nuclear (NLSs) na proteína a ser transportada para a formação de um complexo junto a Importina-β (Impβ) permitindo o transporte da macromolécula. O objetivo do presente trabalho é o estudo estrutural da Impα proveniente do fungo filamentoso Neurospora crassa (ImpαNc), a fim de reconhecer as regiões que determinam especificidades da proteína, além de comparar seu comportamento nativo e na presença de um peptídeo NLS. Os primeiros experimentos com a ImpαNc permitiram uma caracterização inicial da proteína e seu comportamento em solução. Experimentos de cromatografia analítica de exclusão molecular, comparando duas amostras de ImpαNc: (1) na presença do peptídeo NLS da proteína FEN1 (FEN1 NLS) e (2) sem peptídeo NLS, indicaram a formação de aglomerados na amostra 2 e a conformação, predominantemente, monomodal na amostra 1, sugerindo uma maior estabilidade da proteína na presença de peptídeos NLS. Para aprofundar as informações sobre a ImpαNc, experimentos de cristalização foram conduzidos com a proteína complexada ao peptídeo de NLS clássica e monopartida do SV40 (SV40 NLS), conforme experimentos anteriores sugeriram a maior estabilidade da proteína na presença de NLSs. Um primeiro cristal (ImpαNc-1), obtido na condição 0,2mM fosfato de sódio dibásico dihidratado e 20% (w/v) de polietilenoglicol 3350, foi submetido á difração de raios X e apresentou padrão de difração satisfatório para elucidação da estrutura do complexo a uma resolução de 2,05 Å. Um segundo cristal (ImpαNc-2), obtido na ... (AU)

• Processo FAPESP: 12/16371-5 - Estudos estruturais com a importina-alfa do fungo Neurospora crassa e peptídeos de sequências de localização nuclear (NLS)
• Beneficiário: Natália Elisa Bernardes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado