Caracterização de alterações moleculares em pacientes com aceruloplasminemia

Autor(es)

Marina Dorigatti Borges

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2018-07-03

Membros da banca

Kleber Yotsumoto Fertrin; Fernando Ferreira Costa; Sara Teresinha Olalla Saad; Sandra Fatima Menosi Gualandro

• Orientador: Kleber Yotsumoto Fertrin

Resumo

A aceruloplasminemia é uma doença hereditária autossômica recessiva causada por mutações no gene CP, que codifica a proteína ceruloplasmina. Ela está envolvida no metabolismo de ferro e alterações na sua função causam o acúmulo intracelular do metal em locais como cérebro, fígado e pâncreas. O diagnóstico é feito com a detecção da ausência de ceruloplasmina sérica associada a exames de neuroimagem sugestivos de sobrecarga de ferro. No Brasil, não se tem dados sobre sua prevalência e sobre quais mutações estão presentes na população. Este projeto teve como objetivo a caracterização das alterações moleculares que acarretam a aceruloplasminemia em pacientes brasileiros. Foram incluídos três pacientes e, quando possível, familiares em primeiro grau, além de um controle saudável e um controle negativo para proteínas ancoradas por GPI (hemoglobinúria paroxística noturna - HPN). Foram coletadas amostras de sangue periférico para a extração de DNA genômico a partir de leucócitos. Fragmentos de interesse no gene CP e no pseudogene CPP, que possui possível associação com a doença, foram amplificados através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciados. Foram avaliadas também as expressões de ferroportina e ceruloplasmina em monócitos de sangue periférico e em macrófagos diferenciados em cultura primária. Os dados dos familiares dos pacientes foram incluídos em uma revisão sistemática sobre os aspectos clínicos e moleculares de portadores de aceruloplasminemia em heterozigose. Duas novas mutações foram encontradas no gene CP: substituição de uma guanina por uma timina na posição 2879-1, mutação splice site (pacientes 1 e 2), e uma troca de timina por citosina na posição 2756 no éxon 16, levando à substituição de leucina por prolina no códon 919, mutação missense (paciente 3). Análise in silico das proteínas mostrou que ocorre mudança significativa na estrutura das proteínas das pacientes em decorrência das mutações. A imunofenotipagem revelou que as expressões observadas nos macrófagos foram similares àquelas vistas nos monócitos. No sangue periférico, houve detecção das proteínas nos monócitos e nos linfócitos B. As expressões encontradas nos linfócitos B foram similares entre os indivíduos, já a presença nos monócitos variou. A mutação CP c.2879-1 G>T apresentou níveis de detecção de ceruloplasmina-GPI e ferroportina semelhantes àqueles encontrados no controle saudável, enquanto que a mutação CP c.2756 T>C levou a redução considerável de ambas proteínas, perfil parecido àquele visto na HPN. Os resultados apoiam a ideia de que a ceruloplasmina-GPI estabiliza a ferroportina na membrana das células, e mostra que as diferentes isoformas da proteína são expressas de forma independente. Quanto aos parentes em primeiro grau, foram incluídos a irmã da paciente 1 e o filho da paciente 3, ambos heterozigotos para a mutação presente na família. Eles apresentavam nível de ceruloplasmina sérica baixo, mas ainda detectável. Através da revisão sistemática, constatou-se que, na literatura, todos os heterozigotos descritos apresentam ceruloplasmina reduzida, mas apenas parte deles manifestou sintomas neurológicos. Este trabalho é pioneiro na caracterização da aceruloplasminemia na população brasileira, sua variabilidade genética e heterogeneidade de expressão clínica, além de contribuir para o maior conhecimento sobre a expressão e importância da ceruloplasmina no nível celular (AU)

• Processo FAPESP: 16/08072-9 - Caracterização de alterações moleculares em pacientes com aceruloplasminemia
• Beneficiário: Marina Dorigatti Borges
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado