Identificação e caracterização de compostos com propriedades antivirais contra o vírus chikungunya a partir de um ensaio fenotípico : Identification and evaluation of compounds with antiviral proprieties against chikungunya infection using a phenotypic screening strategy

Autor(es)

Rafaela Milan Bonotto

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2019-04-29

Membros da banca

Laura Helena Vega Gonzales Gil; José Luiz Proença Módena; Edison Luiz Durigon; Juliana Velasco de Castro Oliveira

• Orientador: Holanda Gondim de Freitas Junior

Resumo

A febre da Chikungunya é uma doença emergente causada pelo vírus da Chikungunya (CHIKV), entendida como um problema de saúde pública, e que vem se estabelecendo em novas áreas, com epidemias ocorrendo de forma recorrente no mundo, inclusive no Brasil. Na última epidemia, em 2016, ocorreu aumento de novos casos no Brasil em consequência da falta de profilaxia ou terapias para conter a doença. Com isso, estudos focados em antivirais são de extrema importância para a descoberta e desenvolvimento de um novo fármaco para futura aplicação na sociedade. Para esse fim, este trabalho teve o objetivo de desenvolver um ensaio celular fenotípico, no qual foi possível realizar triagens com bibliotecas de compostos farmacologicamente ativos e/ou clinicamente aprovados contra a infecção de CHIKV in vitro. O ensaio foi baseado na metodologia de triagem de alto conteúdo (HCS, High Content Screening), sendo a infecção em células de linhagens humanas Huh 7 por CHIKV imageada e quantificada por meio de imunofluorescência e análise automatizada de imagens. O ensaio foi validado, demonstrando-se robusto e reprodutível, com valor de fator-Z¿ > 0,8, com coeficiente de variação <10% e correlação com r de 0,9. Foram, então, realizadas duas triagens primárias e um estudo em dose resposta de compostos antivirais. Dessas triagens, 4 compostos candidatos foram priorizados para ensaios complementares, nos quais isetionato de pentamidina, brequinar sódico, cloreto de dequalínio e sofosbuvir apresentaram atividade concentração-dependente para diferentes linhagens de CHIKV com seletividade em células Huh 7. Além disso, o tratamento com esses compostos causou uma redução no número total de partículas virais infectivas in vitro, demonstrando serem bons candidatos antivirais. Por fim, estudos de mecanismo de ação demonstraram que a atividade antiviral de isetionato de pentamidina e cloreto de dequalinio está associada a etapas iniciais do ciclo viral de CHIKV, de entrada e início da replicação. Este trabalho estabeleceu um ensaio robusto e confiável baseado na metodologia de HCS para CHIKV, no qual foi possível realizar triagens com coleções de moléculas diversificadas, que resultou na identificação e caracterização de moléculas novas contra infecção viral in vitro, como promissores candidatos antivirais para CHIKV (AU)

• Processo FAPESP: 16/03780-5 - Triagem de compostos contra Chikungunya vírus (CHIKV) baseado em um ensaio de alto rendimento
• Beneficiário: Rafaela Milan Bonotto
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto