Efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) em modelo de neuropatia diabética experimental

Autor(es)

Willians Fernando Vieira

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2020-02-28

Membros da banca

Carlos Amílcar Parada; Gisele Picolo; Rodrigo Antunes de Vasconcelos; Carmen Veríssima Ferreira; Marucia Chacur

• Orientador: Helder Jose Ceragioli; Carlos Amílcar Parada

Resumo

A neuropatia periférica de origem diabética (NDP) acomete 60 % dos pacientes diabéticos e é a causa mais comum de dor neuropática no mundo ocidental. A dor é o principal sintoma da NDP, além da ocorrência de anormalidades da marcha, com alterações na pressão plantar. Existe ainda, uma estreita correlação entre o desenvolvimento da NDP e o aumento de citocinas pró-inflamatórias nos gânglios das raízes dorsais (GRDs), como a interleucina 1? (IL-1?) e o fator de necrose tumoral ? (TNF-?), as quais atuam como ativadoras da via de sinalização das proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPKs), que envolve as proteínas p38, ERK1/2 e c-Jun-N-terminal. Não há tratamento efetivo para a NDP em nível global, exceto o rigoroso controle da hiperglicemia. Dentre outras terapias não-farmacológicas, a Terapia Laser de Baixa Intensidade (do inglês "Low-Level Laser Therapy", LLLT) pode ser uma possível opção de tratamento para a NDP. Contudo, pouco se sabe sobre a influência da LLLT na modulação das vias de sinalização relacionadas à NDP. A partir disso, o objetivo deste estudo foi investigar os mecanismos do efeito anti-hiperalgésico da LLLT em ratos Lewis, portadores de NDP induzida por estreptozotocina (STZ). Os experimentos foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA/UNICAMP), protocolos n. 3902-1 e n. 5337-1/2019. Ratos Lewis isogênicos, machos, 200-250 g, de 4-8 semanas de idade, receberam 5 doses de STZ, 1 dose por dia, durante 5 dias consecutivos (25 mg/kg/dia) ou veículo, tampão citrato de sódio 0,1 M. O diabetes tipo I foi determinado por glicemia ? 250 mg/dL em 48 h após a última injeção de STZ. Ratos diabéticos e controles foram submetidos aos testes de Randall-Selitto, von Frey eletrônico e CatWalk nos dias 0, 7, 14, 21, 24 e 28 após as injeções de STZ ou veículo. Ratos diabéticos hiperalgésicos foram submetidos à LLLT (AsGa, 904 nm; 2,03 J; 70 mW; 29 s) aplicada sobre a região dos GRDs L4-L5, entre os dias 21 e 28. No 28º dia, os ratos foram eutanasiados e os GRDs L4-L5 foram coletados para experimentos de ELISA, RT-qPCR, Western blot, imunofluorescência e espectroscopia Raman. Em paralelo, GRDs de ratos naïve foram usados para cultura primária de neurônios, os quais foram mantidos por 24 h em meio normoglicêmico ou hiperglicêmico e usados para análise da dinâmica de cálcio intracelular, potencial de membrana mitocondrial (MMP), potencial de membrana neuronal por FluoVoltTM, patch clamp whole-cell e ensaio de viabilidade celular por MTT. A LLLT foi capaz de reduzir a intensidade de hiperalgesia mecânica nos ratos com NDP e de restabelecer parâmetros espaciais da marcha, fortemente correlacionados à hiperalgesia [Área da pegada (cm²); Área máxima de contato (cm²); Comprimento da passada (cm)]. A LLLT levou a redução dos níveis de IL-1? e TNF-? no GRD, bem como a expressão de mRNAs para p38 MAPK. Na NDP, houve aumento da fosforilação da proteína p38 MAPK, que foi parcialmente reduzida após a LLLT. Picos do espectro Raman dos GRDs L4-L5, alterados na NDP (2704 cm-1; 2850 cm-1; 2885 cm-1; 3160 cm-1), retornaram à intensidade normal após a LLLT. Neurônios do GRD mantidos em meio hiperglicêmico e expostos à LLLT, apresentaram redução do influxo de cálcio e aumento do MMP, ligado à ativação dos complexos mitocondriais I e III. Não houve influência significativa da LLLT sobre o potencial de membrana neuronal. A LLLT não afetou a viabilidade celular dos neurônios do GRD. De maneira geral, a LLLT apresentou efeito benéfico no tratamento da NDP, pois foi capaz de atuar positivamente sobre as suas principais alterações comportamentais, celulares, moleculares e espectrais (AU)

• Processo FAPESP: 15/12673-5 - Efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) em modelo de neuropatia diabética experimental
• Beneficiário: Willians Fernando Vieira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado