Efeito do lincRNA PVT1 associado ao potenciador de zeste homólogo 2 (EZH2) e ao receptor de andrógeno (AR) sobre a expressão gênica em larga escala em células LNCaP de câncer de próstata

Autor(es)

Alexandre Videira

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ)
• Data de defesa: 2019-05-22

Membros da banca

Sérgio Verjovski Almeida; Diana Noronha Nunes; Eduardo Moraes Reis; Eugenia Costanzi Strauss

• Orientador: Sérgio Verjovski Almeida

Resumo

O lincRNA PVT1 (Plasmacytoma Variant Translocation 1) é um RNA longo não codificador de proteínas (ncRNA) descrito como um oncogene sendo superexpresso em vários tipos de cânceres. LincRNA PVT1 está localizado na região genômica 8q24, também conhecida como \'gene desert\'. O nível de expressão do lincRNA PVT1 está associado ao aumento do risco de câncer de próstata (PCa) e está correlacionado com os níveis de expressão do receptor de andrógeno (AR). No entanto, o mecanismo do envolvimento do lincRNA PVT1 com o AR no desenvolvimento de câncer de próstata ainda não está bem esclarecido. Aqui, nós testamos a hipótese que a formação do complexo AR-EZH2-PVT1 participa na regulação da expressão gênica em câncer de próstata, nas células LNCaP. A imunoprecipitação de ribonucleoproteínas seguida de PCR quantitativo (RIP-qPCR) revelou que o lincRNA PVT1 está associado fisicamente ao AR (12% do input) e à metiltransferase EZH2, proteína componente do complexo repressor Polycomb 2 (36% do input) sob condições suplementadas com andrógeno (+R1881). O lincRNA PVT1 também está associado fisicamente ao AR (10% de input) e à EZH2 (42% de input) em condições de privação de andrógeno (-R1881). Assim, a associação física entre lincRNA PVT1, AR e EZH2 é independente do hormônio andrógeno. Usando uma abordagem de estudo em larga-escala de perda e ganho de função, nossos resultados mostraram que o silenciamento do lincRNA PVT1 em células LNCaP na presença de andrógeno restaura a expressão parcialmente, totalmente ou causa superexpressão de 160 genes que tiveram a expressão inibida por andrógeno. Entre esses genes, destacamos genes envolvidos na regulação da diferenciação celular, em componentes da junção célula-célula, na inibição da migração e invasão celular e no desencadeamento da via apoptótica. Imunoprecipitação da cromatina seguida de PCR quantitativo (ChIP-qPCR), em cultura de células LNCaP suplementada com andrógeno sob silenciamento do lincRNA PVT1, mostrou aumento significativo na ocupação pela marca de histona ativadora H3K27Ac do promotor do gene NOV, um dos genes que tiveram sua expressão aumentada com o silenciamento de PVT1. O ChIP-qPCR também mostrou, após o silenciamento do lincRNA PVT1, um aumento significativo da marca H3K27me3 na região enhancer do gene NOV, uma característica de enhancers poised (prontos para ativação). Em conclusão, nós fornecemos a primeira evidência experimental para um mecanismo de ação do oncogene lincRNA PVT1 em células de câncer de próstata e demonstramos que sua ação inibidora da expressão afeta genes alvo que facilitam a proliferação e migração de células do câncer de próstata, sugerindo que o lincRNA PVT1 é um novo agente no complexo mecanismo de repressão transcricional envolvendo um RNA silenciador, o receptor de andrógeno (AR) e o potenciador de Zeste homólogo 2 (EZH2) no remodelamento da cromatina em células LNCaP. (AU)

• Processo FAPESP: 15/00324-6 - Estudo do controle da expressão gênica do lncRNA INXS envolvido na apoptose
• Beneficiário: Alexandre Videira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado