Efeitos da inibição da proteína PTEN sobre a neuroinflamação em células gliais.

Autor(es)

Amanda Galvão da Paixão

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2018-11-09

Membros da banca

Elisa Mitiko Kawamoto Iwashe; Pedro Augusto Carlos Magno Fernandes; William Tadeu Lara Festuccia; Tatiana Rosado Rosenstock

• Orientador: Elisa Mitiko Kawamoto Iwashe

Resumo

Outrora proposta exclusivamente como fosfatase citoplasmática, hoje sabe-se que as funções da PTEN vão além de sua atividade de fosfatase e podem depender de sua localização na célula. Evidências crescentes apontam para o potencial papel da PTEN sobre a inflamação. Este trabalho objetivou investigar os efeitos modulatórios da PTEN sobre a neuroinflamação e o papel de sua compartimentalização (núcleo/citoplasma) em células gliais. Células gliais primárias de rato foram co-tratadas com BpV(pic) e LPS por períodos de 4h e 24h. Células U87MG (PTENnull) foram desafiadas com LPS e transfectadas com os plasmídeos para localização subcelular da PTEN. Os efeitos foram avaliados por ensaios de viabilidade celular, Western Blotting, imunofluorescência, qRT-PCR, ELISA e Multiplex. A eficiência de inibição da PTEN pelo BpV(pic) foi confirmada pela maior fosforilação da AKT. Em 24h de co-tratamento com BpV(pic), houve redução da resposta ao LPS para as citocinas IL-1<font face = \"symbol\">b e TNF-<font face = \"symbol\">a tanto a nível de RNAm quanto proteico, bem como indução da enzima Arginase-1 e atenuação da expressão do receptor CD206. Ainda em 24h, houve indução da expressão das enzimas antioxidantes Sod2 e Gsr nas células co-tratadas com BpV(pic) e LPS. Em 4h de co- tratamento, a inibição da PTEN por si só induziu a secreção da citocina IL-6. Tanto o BpV(pic) exclusivamente quanto o co-tratamento com LPS não interferiu com a sinalização de IL-10 nem com os níveis de NO. Interessantemente, o desafio com LPS em células U87MG (PTENnull) não induziu resposta via translocação de p65 ou secreção de TNF-<font face = \"symbol\">a, mas reduziu a viabilidade celular em altas doses (100 <font face = \"symbol\">mg/mL). A transfecção das células com plasmídeos para localização subcelular da PTEN sugere que a linhagem U87MG parece não ser facilmente transfectável pelos métodos avaliados. A inibição farmacológica da PTEN mostrou-se um interessante alvo à reversão da resposta glial ao LPS. A continuidade deste estudo com outros esquemas de tratamento com BpV(pic) e utilizando-se um modelo de células PTENnull mais facilmente transfectável pode levar a uma melhor interpretação dos dados obtidos até o momento. (AU)

• Processo FAPESP: 16/07376-4 - Avaliação dos efeitos da compartimentalização da PTEN em células de glioblastoma humano (U87MG) submetidas a estímulo inflamatório
• Beneficiário: Amanda Galvão da Paixão
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado