Perfil global de expressão de MicroRNAs na próstata ventral de ratos submetidos à restrição proteica materna: Efeitos perinatais e reflexos no envelhecimento

Autor(es)

Flávia Bessi Constantino

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Botucatu. 2021-06-17.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências. Botucatu
• Data de defesa: 2021-05-21
• Orientador: Luis Antonio Justulin

Resumo

Nas últimas décadas, foi observado aumento na incidência de câncer na população. Estudos mostram que o câncer pode se originar de insultos sofridos por indivíduos durante a vida intrauterina, visto que que este período é caracterizado pela capacidade do embrião/feto em se adaptar às mudanças ambientais, alterando a expressão gênica por mecanismos pós-transcricionais. Já foi demonstrado que a restrição proteica materna promove a carcinogênese da próstata em ratos idosos; No entanto, há falta de informações sobre o mecanismo molecular envolvido nesse processo. Assim, objetivamos identificar os possíveis microRNAs desregulados em ratos jovens programados e localizar seus possíveis alvos associados à carcinogênese da próstata. Para isso, ratos machos Sprague Dawley nascidos de mães alimentadas com dieta padrão (17% de proteína), grupo controle (CTR), ou dieta pobre em proteínas (6% de proteína), grupo gestational and lactational low protein diet (GLLP), durante a gestação e lactação foram sacrificados no dia pós-natal 21. O sangue foi coletado para analises hormonais e a próstata ventral foi processada para morfologia e por sequenciamento, HigSeq -2500 Illumina, para determinar o perfil do microRNoma. Dados de sequenciamento de miRNAs de pacientes com câncer de próstata, oriundos do the cancer genome atlas (TCGA), foram reanalisados para comparação com os resultados de ratos. Além disso, foi realizada a transfecção do miR-33 em células PNT-2 para avaliar a expressão de seus alvos e a viabilidade celular após tratamento através da técnica de MTT. Assim, foi observado atraso no desenvolvimento da próstata ventral e aumento dos níveis de testosterona e expressão de estrogênio em ratos GLLP. Além disso, 20 miRNAs foram identificados como diferencialmente expressos, 6 down regulados e 14 up regulados. Os resultados de enriquecimento para miRNAs down regulados estão relacionados às vias do câncer e da angiogênese, enquanto os miRNAs up regulados estão enriquecendo vias de retículo endoplasmático e de carcinoma. A reanálise do sequenciamento de miRNA de TCGA revelou 7 em comum com o grupo GLLP. Um deles é o miR-33 que, além de ser down regulado na próstata, também é desregulado no testículo, na glândula adrenal e no fígado, dados gerados através do RTq-PCR. Sua supra expressão nas células transfectadas causou uma diminuição na viabilidade celular e seu alvo, CYP1B1, é uma enzima importante no metabolismo do estrogênio, que pode levar à carcinogênese mediada por mudanças nos níveis hormonais e transformação do estradiol. Concluímos que o miR-33 é um alvo importante para explicar as alterações causadas pela LPD materna podendo, ser considerado um considerável biomarcador por ser desregulado em vários órgãos analisados. (AU)

• Processo FAPESP: 17/08716-6 - Perfil global de metilação e expressão de microRNAs na próstata ventral de ratos submetidos à restrição protéica materna: efeitos perinatais e reflexos no envelhecimento
• Beneficiário: Flávia Bessi Constantino
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado