Papel dos neutrófilos e células T CD8 na infecção por Zika vírus

Autor(es)

Nágela Ghabdan Zanluqui

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2021-10-13

Membros da banca

Jean Pierre Schatzmann Peron; Fernando de Queiroz Cunha; Jorge Elias Kalil Filho; Pryscilla Fanini Wowk

• Orientador: Jean Pierre Schatzmann Peron

Resumo

Infecções por flavivírus são causa de grande preocupação em todo o mudo devido às recorrentes epidemias e altos índices de mortalidade, sendo um grande problema de saúde pública. A relevância do estudo da infecção por ZIKV ganhou destaque devido ao enorme número de bebês nascidos com microcefalia, especialmente no Nordeste Brasileiro, tendo em maio de 2016 sido comprovada a relação causal entre a infecção por ZIKV durante a gestação e os casos de microcefalia. Sabendo-se que o ZIKV, assim como outros flavivírus, tem a capacidade de modular a resposta imune inata e adaptativa do hospedeiro, este projeto visou compreender o papel dos neutrófilos e de células T CD8+Foxp3+ no controle da replicação viral e na progressão da doença em modelo de infecção murina por ZIKV. Para isso, neutrófilos de sangue periférico de indivíduos saudáveis e neutrófilos de medula óssea de animais C57BL/6 e SJL foram utilizados para os experimentos in vitro e, para os experimentos in vivo, animais C57BL/6 IFNAR-/-, C57BL/6 WT, C57BL/6 Foxp3GFP e C57BL/6 CD8-/- foram infectados ou não com ZIKV. Foram realizadas análises para quantificação viral, expressão gênica e citometria de fluxo. Nossos resultados mostraram que ZIKV é capaz de infectar neutrófilos murinos e humanos in vitro sem interferir na meia-vida, produção de ROS e liberação de NETs destas células, além de não induzir expressão de marcadores de ativação celular como MHC-I, MHC-II, CD80, CD86 e IFNAR. Em consideração à expressão gênica, apenas Ifn-b, Axl, Nos2 e Tnf foram alterados. Adicionalmente, neutrófilos infectados com ZIKV foram detectados em sangue e placenta de animais infectados. A transferência de neutrófilos infectados com ZIKV in vitro para animais prenhes foi capaz de causar infecção sistêmica, além da transferência de partículas virais para os fetos, provando que os neutrófilos podem agir como cavalo de Tróia para replicação e disseminação viral na infecção por ZIKV. Por outro lado, a infecção de animais deficientes de células CD8+ apresentou um perfil oscilatório, tendo maior cópias virais no soro, enquanto que menor número de partículas virais no baço em comparação ao grupo controle. Além disso, a análise por PCR Array evidenciou alterações na expressão de genes relacionados ao reconhecimento viral, como o Tlr3 e Nod2 e resposta imune do hospedeiro, como Nfkb1, FasL e Ifn-a. A análise das populações de células do baço mostrou que a infecção por ZIKV induz o aumento da população de células T CD8+Foxp3+. Estas células induzidas durante a infecção por ZIKV expressam altos níveis de FasL e Ly6C e parecem não responder à infecção por ZIKV, enquanto que células T CD8+Foxp3+ de animais naïve induzem maior replicação viral em experimento de transferência adotiva. Tais achados nos levam a crer que existe uma tentativa do patógeno em modular a resposta imune inata e adaptativa no intuito de facilitar sua replicação e permanência no hospedeiro. Em suma, este trabalho buscou elucidar a imunobiologia da infecção pelo ZIKV na gestação, correlacionando com a susceptibilidade à Síndrome Congênita Causada pelo vírus (AU)

• Processo FAPESP: 16/07371-2 - Caracterização do papel de linfócitos T CD8+ na infecção por Zika vírus
• Beneficiário: Nagela Ghabdan Zanluqui
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado