Otimização do sistema de deleção gênica por CRISPR-Cas9 em macrófagos e avaliação de genes potencialmente envolvidos na ativação do inflamassoma de NLRC4

Autor(es)

Letícia de Sousa Lopes

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2022-08-16

Membros da banca

Dario Simões Zamboni; Elaine Zayas Marcelino; Tiago Wilson Patriarca Mineo

• Orientador: Dario Simões Zamboni; Warrison Athanásio Coelho de Andrade

Resumo

O inflamassoma é um complexo multiproteico envolvido na ativação de caspases inflamatórias em resposta a sinais ambientais ou a patógenos. Após o reconhecimento do ligante, o complexo inflamassoma é formado e medeia a clivagem e ativação de pró-IL-1β e pró-IL-18, além de gasdermina-D, levando a secreção das citocinas em suas formas ativas e a morte celular inflamatória, conhecida como piroptose. Dentre os diferentes inflamassomas, NLRC4 e NLRP3 são os mais estudados. O inflamassoma de NLRC4 apresenta um papel crucial na defesa do hospedeiro contra patógenos intracelulares, incluindo Salmonella, Shigella, Legionella e Pseudomonas. Além disso, já foi descrito que mutações no gene de NLRC4 estão ligadas ao aparecimento e progressão de doenças inflamatórias como MAS (Macrophage Activation Syndrome), e enterocolite de início neonatal. Apesar de ser um dos inflamassomas mais estudados, mecanismos envolvidos na ativação e regulação da via de NLRC4 ainda precisam ser identificados. Neste trabalho, nós otimizamos o protocolo de deleção gênica por CRISPR-Cas9, gerando macrófagos primários derivados de medula óssea nocautes para os genes de ASC e NLRC4. Além disso, baseado em ensaios fenotípicos de replicação de L. pneumophila, observamos que a possível deleção dos nossos genes de interesse não levou ao aumento da replicação bacteriana, sugerindo que as proteínas não apresentam papel relevante para a via do inflamassoma de NLRC4. (AU)

• Processo FAPESP: 20/06177-3 - Otimização de um sistema de deleção gênica por CRISPR/Cas9 em macrófagos para avaliar proteínas importantes para a ativação do inflamassoma de NLRC4
• Beneficiário: Letícia de Sousa Lopes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado