A edição do gene STK11 (LKB1) por CRISPR/Cas9 em células não pequenas de câncer de pulmão A549 e a resposta a metformina e cisplatina

Autor(es)

Matheus Brandemarte Severino

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Limeira, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Aplicadas
• Data de defesa: 2023-12-15

Membros da banca

Fernando Moreira Simabuco; Clarissa Ribeiro Reily Rocha; Augusto Ducati Luchessi

• Orientador: Fernando Moreira Simabuco

Resumo

INTRODUÇÃO: O câncer é uma doença complexa que se origina de mutações celulares. Entre os cânceres, os pulmonares têm as maiores taxas de mortalidade. O câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), especialmente o adenocarcinoma, é o mais comum. As células A549, com uma mutação no gene STK11, são frequentemente resistentes ao tratamento com cisplatina, exigindo tratamentos sinérgicos. OBJETIVOS: O objetivo do trabalho foi gerar células A549 com expressão de LKB1 e avaliar sua resposta à cisplatina e à combinação com metformina, comparando-as com as células não editadas (selvagens). METODOLOGIA: O sistema CRISPR/Cas9 foi usado com uma Cas9 recombinante e um RNA guia sintetizado in vitro para editar o gene STK11. Foram realizados ensaios para avaliar a expressão de proteínas por Western Blotting e imunofluorescência, bem como análises do metabolismo glicolítico/aeróbico e do sistema redox, através de NRF2, enzimas antioxidantes e espécies reativas. RESULTADOS: Por meio do reparo NHEJ (non-homologous end joining), uma nova isoforma de LKB1 chamada "Super LKB1" de maior peso molecular foi gerada. Linhagens com essa isoforma mostraram uma maior ativação de AMPK e regulações em mTORC, autofagia e metabolismo. Os clones editados também responderam melhor à cisplatina, possivelmente devido ao acúmulo de H2O2. CONCLUSÃO: A nova isoforma de LKB1 gerada pelo CRISPR/Cas9 foi eficaz na ativação de AMPK, levando a várias regulações celulares e intensificando a atividade apoptótica nas células editadas. Além disso, a metformina intensificou a apoptose induzida pela cisplatina em células selvagens, mas não teve efeitos adicionais nas células editadas (AU)

• Processo FAPESP: 20/13660-2 - Edição do gene LKB1 por CRISPR/Cas9 em células de câncer de pulmão e avaliação de seu papel na resposta à metformina e cisplatina
• Beneficiário: Matheus Brandemarte Severino
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado