Toxina da distensão citoletal (CDT): análise da resposta imune humoral específica em soros de pacientes com diferentes condições periodontais e seu efeito na inibição da atividade macrofágica

Resumo

Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.a) é uma importante bactéria associada a casos de periodontites agressivas e a lesões extra-orais. Possui vários fatores de virulência responsáveis pela colonização dos tecidos bucais, invasão de células eucarióticas e de evasão das defesas do hospedeiro. A toxina da distensão citoletal (CDT) é a única toxina capaz de induzir um dano imediato no DNA das células alvo resultado em parada do ciclo celular na fase G2 e apoptose das células. Essa atividade é demonstrada pela inibição da proliferação de células como linfócitos T e B, da produção de anticorpos e da produção de óxido nítrico por macrófagos. O objetivo deste estudo é determinar se a CDT é expressa "in vivo", e se existe resposta especifica anti-cdt em pacientes com periodontite associada à bactéria. Será realizada a clonagem dos genes cdtA, cdtB e cdtB em vetor de expressão, e purificação de CDTA, CDTB e CDTC. A seguir estes antígenos purificados serão utilizados em ELISA contra soros de 99 pacientes com diferentes condições periodontais. A resposta deve variar entre os pacientes visto que nem todas as cepas de A. a presentes em periodontites produzem CDT, e somente amostras de periodontite agressiva produzem altos títulos tóxicos. A capacidade de neutralização da atividade tóxica pelos soros será testada. Além disso, será estudada a inibição da produção de óxido nítrico(NO), análise do ciclo celular e alterações morfológicas de macrófagos e fibroblastos de cada fração e do complexo CDT. (AU)