Caracterização de ribonucleoproteínas (U1, U2, U5 e u6 snRNPs) em diferentes cepas de Trypanosoma cruzi

Resumo

As ribonucleoproteínas (UsnRNPs), pequenos complexos de RNA e proteínas exercem um papel essencial no processamento do pré-mRNA, principalmente durante o processo de splicing (corte de íntrons e união de éxons). As UsnRNPs apresentam um core de proteínas comuns associadas entre si e com o próprio snRNA denominadas de proteínas Sm e proteínas específicas de cada snRNP, cuja extremidade 5 possui um cap m3G. Como as snRNPs ainda não estão bem caracterizadas em T. cruzi, este trabalho propõe a caracterização das mesmas, utilizando reações de imunoprecipitação com RNA total de formas epimastigotas de T. cruzi e anticorpo anti-m3G, que permitem a separação dos snRNAs, os quais serão clonados e sequenciados após reação de RT-PCR. A seguir, serão realizadas análises do requerimento dos UsnRNAs na reação de trans-splicing com o uso de células permeáveis desses parasitas. As proteínas Sm serão separadas em gel 2D, e localizadas por Western blotting utilizando anticorpo anti-Sm, para posterior análise por espectrometria de massa. (AU)