Estudos estruturais e funcionais das septinas 6, 8 e 10.

Resumo

Para que a divisão celular ocorra é necessário que uma célula passe por algumas etapas que possibilitem esta divisão. Ao conjunto destes processos denomina-se ciclo celular. A regulação espacial e temporal destes processos é fundamental para a preservação celular e do material genético. Falha neste processo pode levar à morte celular ou a alterações genéticas causando divisão desregulada e crescimento de tumores.Dentre diversas proteínas envolvidas no ciclo celular, encontram-se as septinas. Até o momento, foram encontrados 13 diferentes genes para septinas em humanos. Além do papel no ciclo celular, também estão envolvidas em exo e endocitose, apoptose e relacionadas a algumas patologias como parkinsonismo e leucemias.Neste trabalho foram selecionadas três septinas para estudos estruturais e funcionais: septina 6, septina 8 e septina 10. Os cDNA destas septinas, a seqüência nucleotídica referente ao domínio GTPase das septinas e ao domínio GTPase+C-terminal foram amplificados em nosso laboratório e estão sendo clonados para expressão em sistema procarioto ou eucarioto. As proteínas deverão ser purificadas por métodos cromatográficos para a realização dos ensaios de cristalização. A partir dos dados coletados nos experimentos de difração de raios X será possível a resolução e o estudo da estrutura cristalográfica. Os objetivos funcionais incluem testes de atividade GTPásica, ensaios de duplo híbrido e co-expressão de septinas em Escherichia coli. Uma vez que os mecanismos de oligomerização das septinas não estão definidos e nem a especificidade destas interações, os resultados estruturais e funcionais esclarecerão estas questões.