Caracterizacao funcional da interacao entre o trocador na+/h+ nhe3 e a enzima dipeptidil peptidase iv (dppiv) em tecido renal.

Resumo

Demonstrou-se recentemente que a isoforma 3 do trocador Na/H (NHE3) encontra-se associada à enzima dipeptidil peptidase IV (DPPIV) em túbulo proximal. Em estudos realizados em células em cultura (linhagem OKP), verificou-se que inibidores que se ligam ao sítio catalítico da DPPIV reduzem a atividade de NHE3 em cerca de 45%, sugerindo que a DPPIV está envolvida na modulação da atividade deste transportador. Neste projeto pretende-se avaliar os aspectos funcionais da interação entre NHE3 e DPPIV. No primeiro objetivo propomos investigar se a enzima DPPIV modula a atividade de NHE3 "in vivo" e quais são as conseqüências fisiológicas desta modulação. Parâmetros bioquímicos da função renal, atividade e expressão de NHE3, bem como a reabsorção de fluido e bicarbonato serão analisados em ratos tratados com inibidores da DPPIV e ratos tratados com placebo. Pretendemos também determinar a importância da associação física entre NHE3 e DPPIV para a modulação da atividade de NHE3 em células tubulares renais. Este objetivo será alcançado através da deleção da expressão de DPPIV por RNA de interferência em células OKP. Em seguida, avaliaremos nestas células se a transfecção de um contructo mutante de DPPIV que possui suas propriedades catalíticas preservadas, mas no qual o domínio que interage com NHE3 foi removido, tem capacidade de modular NHE3. (AU)