Organogênese e transformação genética de limão Volkameriano (Citrus volkameriana)

Resumo

A transformação genética permite a introdução de genes de interesse agronômico no genoma vegetal, podendo ser utilizada com o objetivo de reduzir os problemas fitossanitários dos citros. A Morte Súbita dos Citros (MSC) é uma doença provavelmente causada por uma estirpe mutante do vírus da tristeza dos citros (CTV) e tem causado sérios danos à citricultura nacional. Assim, a transformação genética pode ser utilizada para a obtenção de plantas resistentes a MSC. Para o uso de técnicas de transformação genética é essencial a disponibilidade de um sistema de regeneração de plantas in vitro para a variedade em estudo. O objetivo deste trabalho é estudar a organogênese e a transformação genética de limão 'Volkameriano'. Os explantes para estes experimentos serão segmentos internodal, coletados de plantas cultivadas em casa-de-vegetação. Para a organogênese os explantes serão cultivados em meio de cultura EME suplementado com diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 1,5 mg/L) testadas individualmente ou em combinação com NAA (0,5 mg/L). A incubação do material será feita no escuro ou sob fotoperíodo de 16 h de luz, a 27C, por um período de 30 dias. A avaliação será realizada determinando-se o número de explantes com brotos. Para a transformação genética os explantes serão inoculados com Agrobacterium tumefaciens contendo o plasmídeo pCAMBIA 2201, com o gene de seleção nptII, o gene repórter GUS e o gene da capa protéica do CTV, numa construção tipo "hairpin". A identificação dos brotos transgênicos será feita pelo teste histoquímico GUS e por PCR. Os brotos positivos serão microenxertados in vitro e após o desenvolvimento as plantas serão aclimatizadas para condições de casa de vegetação. A confirmação da integração e transcrição do transgene será realizada pelas análises de Southern blot.