Identificação e caracterização funcional de proteínas específicas do complexo U5 snRNP de Trypanosoma cruzi

Resumo

Existem cerca de 16 a 18 milhões de pessoas na América Latina infectadas com Trypanosoma cruzi, o protozoário patogênico causador da doença de Chagas. A terapêutica continua parcialmente ineficaz, apesar dos esforços que vêm sendo desenvolvidos por vários laboratórios e pesquisadores. Alguns fatores importantes no funcionamento das células eucariotas são os pequenos complexos de RNA e proteínas; estas partículas de ribonucleoproteínas (UsnRNPs) exercem um papel essencial no processamento do pré-mRNA, principalmente durante o processo de splicing (corte de íntrons e união de éxons). As UsnRNPs apresentam um core de proteínas comuns associadas entre si e com o próprio snRNA denominadas de proteínas Sm e proteínas específicas de cada snRNP, cuja extremidade 5- é marcada pela presença de um cap de trimetilguanosina (m3G). Embora estejam bem definidas em mamíferos, as snRNPs ainda não estão bem caracterizadas em certos tripanosomatídeos como Trypanosoma cruzi. No intuito de aprender mais sobre os fatores de splicing (principalmente as UsnRNPs) que possam estar envolvidos na reação de trans-splicing em tripanosomatídeos, este trabalho propõe identificar e caracterizar proteínas específicas do complexo de U5 snRNP, utilizando para isto clonagem e expressão de genes relacionados com esta partícula, produção de anticorpos para imunoprecipitação do complexo, imuno-localização nas células do parasita, avaliar possíveis interações entre os membros de U5 snRNP usando pull down in vitro e o papel funcional destas proteínas na reação de trans-splicing utilizando as técnicas knock-down (RNA interference), reação de células permeáveis e de proteção com RNases. (AU)