Caracterização molecular e funcional de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos

Resumo

Em tripanosomatídeos, o processo de trans-splicing é responsável pelo processamento dos pré-mRNAs policistrônicos, resultando na individualização de cada gene, de modo que cada mRNA contenha a seqüência spliced leader (SL) na extremidade 5'. Esse processo requer a participação das ribonucleoproteínas (snRNPs) U2, U4/U6, U5 e SL RNP, que são constituídas por snRNAs, 7 proteínas Sm (comuns a todos) e proteínas específicas de cada partícula. Através da produção in vivo e purificação da proteína SmDI-PTP tagged, foi possível a identificação de 41 proteínas que interagem com essa partícula, das quais 16 foram anotadas como proteínas conservadas hipotéticas. Dentre essas, já foram identificados um homólogo da proteína específica U1-A, uma proteína Lsm, uma proteína U5 específica e duas proteínas que não se ligam diretamente a esses snRNAs, mas que provavelmente participam do mecanismo, como fatores de splicing. A identificação das outras 11 proteínas hipotéticas conservadas está em andamento. Sendo assim, este projeto tem como objetivo a análise de funcionalidade destas 16 proteínas, utilizando RNAi e primer extension para a verificação da essencialidade para a sobrevivência do parasita e funcionalidade na reação de trans-splicing e a imunolocalização das mesmas, com o intuito de identificar novos possíveis pontos de ataque quimioterápico parasita-específicos. (AU)