Atualização em imunoistoquímica e técnicas combinadas com hibridização in situ não-radioativa: expressão e ativação do hormônio concentrador de melanina após privação constante de sono REM em ratos

Resumo

Esta proposta representa três meses de atualização na utilização da imunoistoquímica (isolada ou com dupla marcação) e hibridização in situ usando sondas biotiniladas. A abordagem imunocitoquímica será aplicada à análise da expressão do peptídeo hormônio concentrador de melanina (MCH) e do produto do gene de expressão imediata Fos em ratos submetidos ao paradigma de privação constante de sono REM (movimento rápido de olhos) por 10 dias ou expostos a esse paradigma seguido de recuperação breve (2 horas). A abordagem utilizada para a hibridização in situ consistirá em utilizar o mesmo tecido para estabelecer se há alterações no nível de expressão do RNA mensageiro do MCH neuronal e se ele varia entre populações neuronais. Nosso método de hibridização permite avaliar quantitativamente a expressão além de possibilitar a dupla marcação para proteína Fos. Assim, a análise das diferentes populações neuronais que são estimuladas a expressar o gene de expressão imediata podem ser comparadas com aquelas que estão quiescentes na hora do sacrifício. (AU)