Clonagem, expressao, purificacao e caracterizacao do inibidor tipo kunitz-bpti (bmci) identificado em analise de sequencias expressas (ests) de hemocitos de rhipicephalus (boophilus) microplus infecta....

Resumo

O interesse pelo isolamento e caracterização de inibidores ou moléculas do carrapato da espécie B. microplus reside em seu potencial no fornecimento de genes úteis para produção de vacinas contra o parasitismo em bovinos, bem como o conhecimento de sua interação parasito-hospedeiro. Em projeto anterior (Mestrado), foi realizado a clonagem do gene de um inibidor de cisteinoproteases proveniente de biblioteca de cDNA.de corpo gorduroso do carrapato Boophilus microplus. Neste projeto, serão construídas bibliotecas de hemócitos de carrapatos desafiados com fungo M. anisopliae utilizando o sistema SMART, destes clones serão seqüenciados aleatoriamente e comparadas às depositadas em bancos de dados, identificando moléculas com possível papel na resposta imune e potencial como imunógenos para compor uma vacina. A fim de confirmarmos a localização da proteína Bmcistatina, estudos de imunolocalização em cultura de células de corpo gorduroso e no próprio órgão serão realizados. E com intuito de observar a relevância funcional da Bmcistatina, realizaremos experimentos utilizando tecidos de fases diferentes do carrapato para confirmar a expressão gênica de Bmcistatina no B. microplus por Quantitative Real time (Q-RT-PCR), e assim obter informações adicionais e finalmente utilizaremos a técnica de interferência de RNA de Bmcistatina no estudo de sua função. (AU)