RNA de interferência anti-PKR em modelo de metástase experimental

Resumo

O RNA de interferência (RNAi) tem sido utilizado, nos últimos dois anos, como uma importante ferramenta na elucidação da função gênica em células de mamíferos. O papel desempenhado pela proteína quinase dependente de RNA (PKR) nas células tumorais é ainda controverso. No presente trabalho, utilizaremos o RNAi com o objetivo de se elucidar a função da PKR nas células B16-F10 de melanoma murino. O silenciamento do gene da PKR será feito através da transfecção das células B16-F10 com o vetor plasmidial contendo o RNAi anti-PKR. A degradação do RNAm da PKR será avaliada por RT-PCR, enquanto que os níveis desta proteína quinase serão determinados por Western blot. As células B16-F10 transfectadas com o RNAi anti-PKR serão injetadas em camundongos C57BU6 e os efeitos do silenciamento do gene da PKR serão avaliados (1) através da medida do peso tumoral no caso de injeção subcutânea e (2) através da contagem de nódulos pulmonares metastáticos no caso de injeção endovenosa. (AU)