Identificação dos mecanismos reguladores da RALDH2 durante a padronização dorso-ventral do tubo neural

Resumo

A sinalização pelo ácido retinóico (AR) é fundamental para o correto desenvolvimento embrionário. A principal enzima responsável peia síntese do AR durante o desenvolvimento é a RALDH2, cujo padrão de expressão é bastante dinâmico. Estudos de bioinformática identificaram várias regiões evolutivamente conservadas (ECRs) entre o gene RALDH2 de vertebrados. Estas seqüências estão distribuídas da região 5' à região 3', com destaque para o intron 1, onde se encontra um ECR conservado de anfíbios até humanos (RALDH2.2). Utilizando ensaios de eletroporação e transgênese em camundongos, nós mostramos que o ECR RALDH2.2 é um enhancer neural conservado do gene RALDH2. Através de ensaios de eletroporação de deleções, identificamos a existência de um elemento repressor que restringe a expressão do ECR à placa do teto e interneurônios nos primeiros 526pb desse enhancer e de um elemento responsável pela forte expressão do ECR na placa do teto nos 291 pb seguintes. O objetivo deste projeto é entender a regulação da expressão da RALDH2 durante a padronização dorso-ventral do tubo neural. Para tanto, analisaremos em profundidade os elementos regulatórios presentes nesse ECR. Através de análises de sítios putativos de ligação para fatores de transcrição, mutações sítio-direcionadas, superexpressão ou inativação de BMPs e Wnts combinados com eletroporação, pretendemos elucidar os mecanismos controladores da expressão do gene RALDH2 através do ECR RALDH2.2 no tubo neural. (AU)