Controle da expressão do gene da RALDH2 durante o desenvolvimento: uma abordagem filogenética

Resumo

A sinalização pelo ácido retinóico (AR) é fundamental para a diferenciação ântero-posterior (AP) do embrião e para o correto desenvolvimento do coração embrionário. Trabalhos do nosso grupo e de outros mostraram que a retinaldeído desidrogenase do tipo 2, RALDH2, é o ponto focal da regulação da sinalização pelo AR no coração embrionário. Seus padrões complexos de expressão e seus papéis no desenvolvimento sugerem que o gene da RALDH2 apresenta um controle tipicamente modular. Entre as RALDHs, a RALDH2 é a única a apresentar, em seu gene, uma conservação profunda de seqüências não exônicas entre vertebrados tão distantes quanto mamíferos e peixes. Isto sugere que esses blocos conservados são módulos regulatórios, conforme demonstramos em nossas análises funcionais. Dentre os vários blocos candidatos, com homologia superior a 75%, ao longo do gene da RALDH2, nós destacamos um bloco localizado no intron 1, conservado desde anfíbios até humanos que funciona como enhancer para o tubo neural posterior em camundongos transgênico transitórios. O objetivo deste projeto é identificar regiões cis-regulatórias do gene da RALDH2. Para tanto, nós combinaremos a abordagem evolutiva de análise de regiões conservadas e identificação de motivos regulatórios (um estudo de bioinformática) com a análise funcional, utilizando transfecções em cultura de células, mutagênese, eletroporação em embriões de galinha e transgênese em camundongos. (AU)