Genes de glandulas salivares do carrapato do boi, rhipicephalus microplus, afetados pela resposta imune do hospedeiro: clonagem e expressao para avaliacao do potencial como antigeno vacinal.

Resumo

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, o carrapato dos bovinos, causa enormes prejuízos à saúde e produção animal. Um estudo bioinformática comparativo dos transcriptomas de glândulas salivares e larvas não alimentadas de R. microplus, obtidos a partir de diferentes situações fisiológicas, revelou genes importantes para a hematofagia, cuja expressão gênica foi afetada pela resposta imune do hospedeiro, portanto, úteis para comporem uma vacina anti-carrapato. A hipótese de trabalho é a de que genes expressos diferencialmente em situações de parasitismo distintas e o padrão de reconhecimento dos produtos destes genes pelos hospedeiros (não reconhecimento pelo hospedeiro suscetível e reconhecimento pelo resistente) podem constituir bons candidatos para compor uma vacina anti-carrapato. Objetivos: 1) confirmar a expressão gênica diferencial dos genes de interesse; 2) clonar e expressar esses genes; 3) avaliar o reconhecimento das proteínas recombinantes (recPs) pelo soro dos hospedeiros; 4) caracterizar a atividade das recPs para elucidar seus papéis na resposta imune do hospedeiro e 5) imunizar de bovinos com as recPs e avaliar proteção através de desafio com R. microplus. Metodologia: RT-PCR quantitativo será utilizado para confirmar a expressão diferencial dos genes alvos. A clonagem e expressão de proteínas serão realizadas em sistema procarioto (E. coli) e eucarioto (levedura), utilizando os vetores pET17b e pYGEX, respectivamente. Western blots de proteínas recombinantes serão realizados para avaliação do reconhecimento pelo soro de hospedeiros infestados. Ensaios in vitro de proliferação celular, migração celular, atividade anti-complemento e atividade anti-hemostática serão realizados com as recPs. Bovinos serão imunizados com recPs, sendo 3 doses em intervalos de 10 dias, no 30° dia serão desafiados com larvas de R. microplus e os parâmetros biológicos dos carrapatos analisados. Os soros dos animais serão coletados antes de cada dose e Western blots e ELISA com as proteínas recombinantes serão realizados para avaliação de reconhecimento dos antígenos e dosagem de anticorpos. (AU)