Prospecção do salivoma de carrapatos para descoberta de novos componentes antimicrobianos

Resumo

Glândulas salivares (GS) de carrapatos contêm muitas moléculas com potencial para serem empregados novos antimicrobianos, que são urgentemente necessários. Geramos um transcriptoma totalmente anotado, obtido com tecnologia de sequenciamento 454, para as GS de vários estágios de desenvolvimento de Rhipicephalus microplus, o carrapato dos bovinos. O proteoma correspondente foi construído com MudPIT. Nestes encontramos muitas sequências codificantes para peptídeos antimicrobianos (PAMs) putativos e com sinais de serem secretados. Os PAMs estão distribuídos em diversas famílias, cada uma com vários membros: defensinas, hebraínas, domínio tipo TIL (trypsin inhibitor-like), longicornisinas e uma família com semelhanças intermediárias para inibidores de elastase de neutrófilos e PAMs. Além disso, proteínas reconhecedoras de domínios patogênicos, como a ficolina e proteínas contendo o domínio ML também foram encontradas. Nada é conhecido sobre a atividade biológica desses PAMs. De modo a identificar novos PAMs iremos sintetizar peptídeos guiados por> 80 sequências completas codificadoras, contendo sinais de serem secretadas. No caso de proteínas TIL-domain maiores, iremos expressar proteínas recombinantes. Estes candidatos serão testados em ensaios padrão de inibição do crescimento microbiano, a fim de determinar as suas concentrações inibitórias mínimas, e em ensaios padrão para avaliar estabilidade sob diferentes temperaturas e pH. A toxicidade para células de mamíferos será inicialmente avaliada por meio de ensaios padrão de lise de glóbulos vermelhos. Peptídeos serão sintetizados por meio de prestação de serviços. Esperamos identificar vários PAMs candidatos para o desenvolvimento de novos antimicrobianos.Palavras chaves: Peptídeos antimicrobianos (PAMs); saliva; carrapatos; Rhipicephalus microplus.