Identificação de proteínas plasmáticas e de componentes proteicos e lipídicos na parede celular de dois isolados geneticamente distintos de Paracoccidiodes brasiliensis

Resumo

O objetivo do projeto atual é detectar proteínas covalentemente ligadas lipídeos de parede celular, expressos comparativamente no Pb3 e Pb18, os quais pertencem a grupos genéticos distintos de Paracoccidioides brasiliensis e suscitam infecções com padrões diversos em camundongos B10.A. A expressão das moléculas será comparada paralelamente em meio suplementado ou desprovido de soro fetal bovino. Moléculas de interesse selecionadas a partir desses dados serão analisadas individualmente em relação à localização, expressão diferencial, atividade biológica, imunológica, possível estudo de biogênese, além de outras que sejam pertinentes. Para tal, será feita a caracterização dos genes, expressão heteróloga das proteínas e obtenção de anticorpos. A partir de resultados preliminares de proteoma diferencial da parede obtido pelo grupo para Pb3 e Pb18, a proteína TSA ("thiol specific anti-oxidant") foi selecionada para análise imediata. As extrações de proteínas covalentemente ligadas serão feitas de acordo com protocolos da literatura. As análises de peptídeos tripticos serão realizadas por espectrometria de massas/cromatografia líquida (MS-LC/LC) e validadas. A fração lipídica será extraída com clorofórmio/metanol e analisada por TLC preliminarmente no laboratório, seguida de cromatografia gasosa/espectrometria de massas (GC-MS) e espectrômetro de massas/ionização por "eletrospray" (ESI-MS). A detecção e análise cromatográfica fina de proteínas e lipídeos resultantes de fracionamentos da parede celular será realizada em colaboração com o Dr. Igor C. Almeida, da Universidade do Texas em El Paso. Para tal, pode ser necessário que a estudante disponha de alguns meses em seu laboratório. (AU)