Análise proteômica e transcriptômica em ossos de linhagens de camundongos com diferentes susceptibilidades genéticas à fluorose submetidos a tratamento crônico com flúor

Resumo

A genética influencia a arquitetura óssea e suas propriedades mecânicas. Estudos recentes, utilizando linhagens diferentes de camundongos tratados com flúor (F) demonstraram que fatores genéticos podem contribuir para a variação da resposta óssea à exposição ao flúor (F). Entretanto, ainda não se sabe quais os mecanismos envolvidos nesse processo. O recente desenvolvimento de técnicas proteômicas tem permitido a análise do perfil protéico completo dos sistemas biológicos, permitindo um melhor entendimento da fisiologia normal do organismo, bem como dos mecanismos de doenças, descoberta de biomarcadores para detecção precoce de doenças, identificação de novas terapias e descobertas de fármacos. Este estudo usará técnicas proteômicas e transcriptômicas para analisar a expressão protéica diferencial em ossos de duas linhagens de camundongos que apresentam diferentes susceptibilidades do osso à exposição crônica ao F (A/J "susceptível" e a 129P3/J "resistente"). Serão utilizados 3 grupos os quais receberão água com 0 (controle), 10 ou 50 ppm F. Após o período experimental os animais serão eutanasiados e os ossos coletados. As proteínas ósseas dos camundongos serão extraídas e submetidas à eletroforese bidimensional. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster 2D Platinum. Os spots de interesse serão excisados e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF) para identificação das proteínas. Em adição, o PCR em tempo real será utilizado para avaliar diferença na expressão de RNAm de proteínas-alvo em osteoblastos de camundongos expostos ao F.