Enzimas proteolíticas envolvidas em processos fisiológicos e fisiopatológicos

Resumo

As enzimas proteolíticas realizam uma variedade de funções essenciais para todos os organismos vivos. Genes de peptidases são encontrados nos genomas de todos os organismos celulares e de vários tipos de vírus, sendo responsáveis por aproximadamente 2% do produto gênico total, distribuídos em compartimentos celulares e teciduais. Entretanto, em vários estados patológicos as peptidases são expressas de forma desordenada, sugerindo que inibidores específicos destas enzimas poderiam ser usados como drogas. Embora a nossa proposta seja o estudo de diferentes classes de peptidases, o trabalho converge para um objetivo comum que é contribuir para um melhor entendimento da função destas enzimas usando substratos com supressão intramolecular de fluorescência. Estes substratos são muito sensíveis e possibilitam o monitoramento da velocidade de hidrólise direto na cubeta do fluorimetro ou nas leitoras de placa, tomando os ensaios simples e rápidos. Pela alta sensibilidade do método, estes compostos têm sido usados com sucesso no estudo de especificidade de todas as classes de peptidases e no ensaio de inibidores seletivos. Esta importante linha de pesquisa do nosso grupo possibilitou o estabelecimento de colaborações com diversos grupos nacionais e internacionais resultando em importantes publicações. Mais recentemente temos focado no estudo de duas classes de enzimas diretamente envolvidas em processos fisiopatológicos: metalo-peptidases (enzima conversora da angiotensina I e PHEX) e cisteino-peptidases lisossomais (catepsinas L, B, V, K e S). Para dar continuidade aos nossos estudos estamos solicitando no presente projeto a aquisição de dois espectrofluorimetros e um equipamento para purificação de proteínas pelo sistema FPLC (Akta) para substituir os que foram adquiridos a mais de 10 anos e que vem apresentando problemas devido ao uso prolongado. (AU)