Efeitos da interação entre células endoteliais e jararagina em culturas tridimensionais ricas em colágeno.

Resumo

As células endoteliais são importantes alvos das metaloproteinases de venenos de serpentes (SVMPs), e a combinação de suas propriedades catalíticas e anti-adesivas pode induzir lesões no endotélio, por diferentes mecanismos, resultando na extensa hemorragia provocada por venenos ofídicos. As SVMPs são capazes de induzir várias alterações nas células endoteliais como a sua ativação e liberação de mediadores inflamatórios, aumento da proliferação e expressão de VEGF, além das alterações no citoesqueleto de actina, diminuição dos níveis de FAK fosforilada e ativação de caspases que levam a morte celular, freqüentemente associada à atividade hemorrágica dessas toxinas. Entretanto, esses efeitos parecem não se relacionar com as lesões teciduais observadas em modelos in vivo onde a presença de apoptose é pouco notada, sugerindo que diferentes modelos de cultura celular precisam ser empregados para entender o comportamento das células endoteliais sob ação de toxinas hemorrágicas. Em nosso laboratório, trabalhamos com a jararagina, uma metaloproteinase hemorrágica isolada do veneno de Bothrops jararaca, capaz de induzir apoptose/anoikis em células endoteliais. Recentemente, verificamos que a jararagina possui alta afinidade pelo colágeno, e que esse evento está relacionado à expressão da atividade hemorrágica desta toxina, em experimentos in vivo. Tomados conjuntamente, esses resultados sugerem que a ação da jararagina em células endoteliais envolve diferentes vias de sinalização, por ativação direta da toxina e/ou pelo bloqueio da sinalização mediada por componentes da matriz extracelular. Diante disso, o objetivo desse projeto é avaliar a interferência da jararagina no contato célula-matriz, em culturas bidimensionais tendo o colágeno como substrato ou culturas tridimensionais ricas em colágeno. Nessas culturas serão avaliados o citoesqueleto e as moléculas sinalizadoras que participam da adesão célula-matriz, e a localização celular da jararagina, por ensaios de imunofluorescência e citometria de fluxo. Esta abordagem é muito importante para a elucidação do mecanismo de ação das SVMPs em células endoteliais, identificando os principais mecanismos envolvidos na indução de lesões no endotélio por metaloproteinases.