Analise funcional de alfa/beta hidrolases de interesse biotecnologico.

Resumo

Este projeto tem como foco principal a caracterização de diferentes hidrolases com potencial biocatalítico. Visando à aplicação das mesmas em diversos campos da indústria. As hidrolases em questão são lípases, proteases e epóxido hidrolases (EH) que serão isoladas a partir de uma biblioteca metagenômica construída a partir de DNA total de microbiota recuperada de reservatórios biodegradados de petróleo. A biblioteca consiste em 30.000 clones, dos quais 1000 representam exclusivamente bactérias anaeróbias e o restante é representante da microbiota aeróbia e anaeróbia (mista). Apenas 9.000 desses clones foram analisados em estudos prévios por ensabs de triagem de alto desempenho para a seleção da atividade biocatalítica, sendo que já foram encontradas 20 proteases e 2 lípases (biblioteca mista). Espera-se que, ao final dos processos de triagem enzimática, outras hidrolases sejam encontradas. Paralelamente a estas análises, uma epóxido hidrolase de Aspergillus niger (CCT1435) com atividade catalítica superior a de outros fungos também será caracterizada. Para tanto, essas hidrolases serão clonadas e expressas para posterior caracterização, purificação e resolução da estrutura tridimensional das mesmas. Com o conhecimento das estruturas protéicas pode-se ainda aplicar abordagens moleculares que alterem a conformação nativa destas proteínas tornando-as mais especificas e eficientes. (AU)