Efeito da toxina distensora citoletal de aggregatibacter actinomycetemcomitans sobre a modulacao do sistema imune.

Resumo

A.actinomycetemcomitans, associado à etiologia da periodontite agressiva, produz a toxina distensora títoletal (CDT). A CDT é a única toxina capaz de induzir dano no DNA das células alvo, parada do ciclo celular na fase G2 e apoptose. É produzida por uma série de patógenos associados às mucosas e foi sugerido seu papel na perpetuação da infecção. Em estudo prévio demonstramos que AaCDT interfere na ativação de macrófagos, provocando inibição da produção de NO, porém induzindo a maior produção de IL-12. Objetivos: o presente estudo visa avaliar o efeito da AaCDT sobre células monocíticas, pela interferência na ativação maturação de macrófagos e células dendríticas por LPS, e sobre a osteoclastogênese. Métodos: as subunidades CDTA, B e C serão purificadas de amostras de E. coli recombinantes. Serão utilizados macrófagos Raw 264.7, macrófagos peritoneais murínicos, células dendríticas e pré-osteoclásticas obtidas a partir de células de medula óssea de camundongos C57BL/6, e C57BL/6 KO em iNos, TLR4 e TLR2. Atividade CDT será analisada durante a maturação de células dendríticas. Macrófagos e células dendríticas serão ativados com LPS de E. coli e de A.a e IFN-y (para macrófagos) ou TNF-α (células dendríticas) na presença de diferentes concentrações de CDT . Será determinada a viabilidade e indução de apoptose promovida por CDT. A análise da produção de citosinas será realizada através de ensaio de ELISA. A caracterização de receptores de membrana será realizada por citometria de fluxo. Arrays para genes associados a vias de sinalização e produção de NO serão empregados para determinação da expressão gênica após contato com a toxina. A capacidade fagocitica será determinada empregando A.a selvagem e mutante cdt deficiente. Será realizada a caracterização da atividade CDT in vivo na proliferação de linfócitos T murínicos. A osteoclastogênese mediada por RANKL de monócitos de medula na presença de CDT será determinada através de análise morfológica e de reabsorção de dentina in vitro. (AU)