Purificação e clonagem da redutase e luciferase de fungos bioluminescentes.

Resumo

A emissão de luz por diversos seres tem sido bastante estudada nas últimas décadas. Em vários sistemas bioluminescentes, as luciferases e demais proteínas acessórias adquiriram vastíssima aplicação biotecnológica e biomédica. Contudo, existem ainda sistemas bioluminescentes pouco estudados, como o sistema de fungos, cuja purificação e caracterização das enzimas relacionadas à emissão de luz poderiam contribuir para estudos mecanísticos, evolutivos e o desenvolvimento de novas ferramentas analíticas.Apenas recentemente foi comprovado o envolvimento de uma luciferase no processo de emissão de luz em fungos. Em 2009, Oliveira e Stevani corroboraram a hipótese enzimática, desenvolvida durante a década de 1960, por Airth e Foerster. Segundo os autores, de maneira semelhante ao que ocorre em bactérias, uma a redutase dependente de NAD(P)H e uma luciferase estão envolvidas na luminescência de fungos, porém a natureza dessas enzimas permanece indeterminada.Considerando a crescente demanda por métodos de marcação celular, e de biossensores, seria intereressante caracterizar as enzimas fúngicas relacionadas à bioluminescência e localizar os genes responsáveis pela expressão protéica. O presente projeto tem como objetivo purificar, caracterizar, clonar e expressar as enzimas redutase e luciferase envolvidas na bioluminescência fúngica, utilizando o fungo "Pleurotus" gardneri como fonte de material.