Caracterização Funcional: A cinase humana Nek5 interfere negativamente na morte celular e no processo de poliglutamilação

Resumo

As proteínas cinases Nek (NIMA related kinases) constituem uma família altamente conservada de proteínas envolvidas na progressão do ciclo celular. Em humanos foram identificadas 11 Neks (1-11), sendo que para algumas a estrutura já foi determinada, bem como a relevância fisiopatológica. Várias proteínas da família das Neks são produtos de genes relativos a patologias relacionadas a defeitos na progressão do ciclo celular e no mecanismo de reparo de DNA durante a interfase, sobretudo em diferentes cânceres. A proteína Nek5 foi identificada, de acordo com sua sequência genômica em organismos como Homo sapiens, Mus musculus, Bos taurus, dentre outros. Entretanto, características inerentes a proteína permanecem pouco elucidadas, como por exemplo sua função, estrutura e interações. Portanto, o objetivo geral deste projeto é a clonagem, expressão e purificação de Nek5 para ensaios biofísicos e de cristalização, visando análises estruturais. Em paralelo, serão realizados: 1) estudos funcionais envolvendo silenciamento por RNA (iRNA) e superexpressão de Nek5 em células humanas; 2) identificação por espectrometria de massas de proteínas que interagem com Nek5 através de 'pull down' e ensaio de duplo híbrido; e 3) ensaios de deslocamento térmico baseado em fluorescência e outros ensaios in vitro a fim de verificas alvos para inibição de atividade de Nek5.