Anticorpos recombinantes (scFv) contra a proteína EspB e as toxinas Stx1 e Stx2: obtenção e caracterização dessas ferramentas para o Imunodiagnóstico de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e Escherichia coli produtora da Toxina de Shiga (STEC)

Resumo

Os ensaios imunossorológicos apresentam diversas vantagens quando comparados a outros métodos de detecção. Dentre as inúmeras vantagens desses métodos podemos citar: alta especificidade, sensibilidade, fácil preparação da amostra, fácil execução, além da rápida obtenção dos resultados. Anticorpos policlonais ou monoclonais são obtidos a partir de animais e apresentam diferentes características quando comparados. Anticorpos gerados a partir da resposta imune natural ou através de imunização (policlonais) apresentam-se como uma mistura de moléculas com diferentes afinidades e especificidades, sendo produzidos em quantidades limitadas. Em contraste aos anticorpos policlonais, os monoclonais apresentam homogeneidade, alta especificidade e são produzidos ilimitadamente, através da cultura de células especializadas e um extensivo envolvimento de tempo e trabalho. Com o intuito de manter a homogeneidade e a especificidade dos anticorpos monoclonais, aliados ainda à produção em larga escala com baixo custo, a engenharia genética tem sido utilizada para obtenção de anticorpos recombinantes. A tecnologia do DNA recombinante permite o desenvolvimento de construções que mantenham ou aperfeiçoem as propriedades funcionais de um anticorpo. Atualmente é possível a produção de fragmentos de anticorpos, como proteínas recombinantes, utilizando diferentes sistemas de expressão para obtê-los. Dentre as diferentes construções baseadas na estrutura do anticorpo, podemos citar os fragmentos variáveis em cadeia única (single chain Fragments variable ou scFv). O scFv é o menor fragmento de anticorpo que ainda retém a capacidade de se combinar com o antígeno. Partindo-se da premissa na limitação da produção de anticorpos policlonais e do extensivo envolvimento de tempo e trabalho na produção de anticorpos monoclonais surgiram os objetivos do presente trabalho que consiste na obtenção de fragmentos solúveis de anticorpos recombinantes (scFv) contra a toxina Stx1 e Stx2 de Escherichia coli produtora da toxina de Shiga, assim como contra a proteína secretada EspB de Escherichia coli A/E positivas em altas concentrações, purificação e caracterização destes quanto sua atividade funcional.