Efeito da luz e endotelina no mecanismo molecular do relogio em melanoforos de xenopus laevis

Resumo

Os relógios biológicos são fundamentais para a sincronização do comportamento dos organismos a mudanças no fotoperíodo. Uma alça auto regulatória de transcrição e tradução de genes, chamados genericamente de genes de relógio, é a base molecular que regula os relógios biológicos. Considerando que células em cultura possam constituir modelos de relógios periféricos, avaliaremos a expressão dos genes de relógios em melanoforos de Xenopus laevis, os quais respondem com migração pigmentar a uma variedade de agentes, incluindo endotelinas. Em células pigmentares de humanos, endotelinas. Atuam como agentes mitogênicos e melanogênicos evocando diversas vias de sinalização, envolvendo participação de cálcio, via das MAP kinases e PKC Pretendemos determinar o padrão temporal da expressão dos genes de relógio e sua modulação por endotelina-3. Para tanto, será quantificada a bigluminescência de luciferina gerada pela ativação da luciferase ligada ao promotor de Perl, além da quantificação da proteína dos genes do relógio. Ainda, serão realizados ensaios de PCR quantitativo na presença e na ausência de bloqueadores específicos de componentes de cascatas intracelulares para determinação das vias de transdução do sinal envolvidas na modulação de Opn4x por endotelinas. (AU)