CARACTERIZAÇÃO FUNCIONAL E ESTUDO DOS MECANISMOS DE RESPOSTAS AO DANO CELULAR CAUSADO PELA L-AMINOÁCIDO OXIDASE DE Calloselasma rhodostoma EM LINHAGENS CELULARES HUMANAS

Resumo

As peçonhas de serpentes de uma forma geral são constituídas por uma grande variedade de proteínas com efeitos tóxicos que podem causar danos teciduais locais ou sistêmicos. A busca por compostos ativos, presentes nas peçonhas de serpentes, que são responsáveis pelo quadro do envenenamento ofídico tem sido alvo de muitas pesquisas. As L-aminoácido oxidases (LAAOs) constituem um dos principais componentes dos venenos de serpentes e tem sido estudadas devido à sua presença em grande quantidade, mas principalmente devido aos diversos efeitos fisiopatológicos em que está envolvida como, indução de apoptose, citotoxicidade, indução e/ou inibição de agregação plaquetária, hemorragia, hemólise, edema, atividade bactericida, leishmanicida, anti-HIV, entre outros. As LAAOs isoladas e caracterizadas de venenos de serpentes tornaram-se importantes alvos de pesquisa, devido ás suas possíveis aplicações biotecnológicas, na busca de novos fármacos de interesse na clínica médica e científica. O principal objetivo deste projeto é caracterizar funcionalmente a L-aminoácido oxidase de Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) a fim de avaliar a ação dessa proteína no processo inflamatório, na atividade antiparasitária (tripanomicida e leishmanicida), fungicida, bactericida e citotóxica sobre as células tumorais HL-60 e HEPG2 e células normais PBMC. Outros parâmetros para análise de indução de células apoptóticas serão avaliados pela metodologia de citometria de fluxo, além da análise da atuação dessa toxina sobre o ciclo celular. Em sequência, serão verificadas as vias de atuação da CR-LAAO frente aos estudos de expressão gênica, caracterizando as vias de apoptose mediadas pelos genes pró-apoptóticos Bax, Fas e o gene anti-apoptótico Bcl-2, utilizando a metodologia de PCR em tempo real. Este estudo permitirá a melhor compreensão dos diversos mecanismos de ação que envolvem esta enzima multifuncional e abrirá perspectivas para uma possível utilização desta proteína como modelo molecular e para o desenvolvimento de novos fármacos para aplicações terapêuticas.